• Santé - Plasmide, Molécules, Bactéries

amplification dans un plasmide

je m'interrsse à la transgenèse et j'ai lu qu'une des étapes pour fabriquer un OGM était l'amplification du plasmide chez l'E.coli.  [...] Lorsqu'on insert une molecule de plasmide chez coli, la bactérie va rpliquer le plasmide jusqu'a avoir 50 à 100 molécules par bactéries.  [...]

Bactéries et microbes en tout genre | Dossier

Les bactéries sont de minuscules êtres vivants faits d'une seule cellule, présents un peu partout. l'air, les sols, l'eau, la peau. Certaines provoquent des maladies (rhume, listériose) d'autres sont utiles à l'homme. présentes dans l'intestin elles aident à digérer, elles sont utilisées pour fabriquer des aliments (yaourts, choucroute).  [...] Elles contiennent également d'autres molécules d'ADN appelées plasmides, qui portent les gènes de résistance aux antibiotiques. Ces plasmides sont très utilisés en recherche. En intégrant un gène dans un plasmide, on peut obtenir une grande quantité de ce gène car la multiplication des bactéries est facile et rapide.  [...]

[Divers] Plasmide et bactérie

Vous disposerez au depart de 3ml de culture bacterienne ayant poussé toute la nuit, cela represente 3.10^9 bacteries. En admettant qu'apres le TP vous ayez purifié 1microgramme d'un plasmide de 3000 pb, calculez le nombre de molecules de plasmide conte,u dans une bacterie.  [...] Si c'est le point de départ. il faut que tu calcules le nombre total de plasmides. Pour ça, il faut que tu connaisse le nombre total de bases, que tu diviseras par le nombre de bases du plasmide.  [...]

utilisation des résistances aux antibiotiques

Pourquoi n est il pas preferable d'inserer des genes codant pour la synthese de molecules de type fluorescentes ou phosphorescentes pour reperer les bacteries exprimant le plasmide (et donc le gene cible). Ainsi, on eviterai de donner aux bacteries les armes pour contrecarre nos seuls armes.  [...] Le fait est qu'on ne va pas repérer les bactéries qui ont intégré le plasmide, on veut les sélectionner spécifiquement et les isoler.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

- Au cours des divisions cellulaires, le plasmide peut ne pas être transmis à certaines bactéries filles, il y aura donc apparition de bactéries non résistantes.  [...] - Lorsqu'on insère un plasmide dans des bactéries, certaines bactéries du lot n'insèrent pas le plasmide et restent donc non résistantes.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

En fait le plasmide ne comprend pas tout le canal chlore, il ne contient que le promoteur de CFTR, associé à une firefly luciferase. Par conséquent les bactéries ne synthétisent rien de mauvais en théorie.  [...] Je viens de relire ton message et comme je ne sais plus qui le mentionnait auparavant, il se peut que la machinerie cellulaire de la bactérie lise le plasmide et synthétise des molécules qui lui serait nocives vu que les constructions sont artificielles en général.  [...]

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

je m'interesse aux OGM et j'aimerai savoir comment concretement les scientifiques procèdent pour,une fois qu'ils ont identifié pour une fct° d'un être vivant la ou les protéines qui sont à l'origine de cette fonction (quand je parle de fonction c'est par exemple le fait qu'une bactérie puisse produire une protéine insecticide, ici ce sera sa fonction intéressante), ils retrouvent le gène qui est à l'origine de cette protéine.  [...] Pour le vérifier on l'insère dans un plasmide bactérien et on transforme des bactéries. En cultivant ces bactéries sur un milieu permettant de différencier celles qui produisent notre molécule d'intérêt et celles qui ne la produisent pas, on récupérer les bactéries contenant le gène codant pour la synthèse de cette molécule.  [...]

PCR et vecteur de clonage

Les vecteurs de clonage permettent d'obtenir un vecteur (plasmide, phagemide, cosmide etc...) quand on parle d'amplification de l'ADN, c'est alors que tu as une molécule qui va se répliquer dans la bacterie (comme les chromosomes) ceci va permettre d'obtenir un grand nombre de copie du plasmide.  [...] Donc il doit etre possible de calculer l'amplification en aprtant du postulat (faux) qu'une seule molecule transforme une bacterie. tu connais le nombre de plasmide par cellule, et le nombre de cellules dans une culture de 5ml alors cela te donne un nombre de molecules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Donc vérifier que tes bactéries sans plasmide sont bien sensibles aux deux antibios, et d'abord faire pousser les bactéries transformées sur strept, puis repiquer les colonies en les identifiant sur ampicilline, puis tester par miniprep celles qui ne poussent pas sur ampicilline.  [...] C'est l'insert qui porte le gène de résistance à la néomycine. Donc, si j'ai des colonies sur LB+strepto+néo, c'est que mon plasmide est recombiné et est dans les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

Pour ce qui est de la GFP je me disais juste que si mes bactéries sont vertes c'est qu'elles ont bien intégré le plasmide mais vu qu'elles poussent en présence d'antibio c'est que c'est bon. Comme elles ne sont pas vertes je pense que c'est juste qu'il n'y a pas de promoteur procaryote pour la GFP dans mon plasmide.  [...] De deux choses l'une. soit ta combinaison plasmide/bactérie donne un faible rendement, soit ta technique de purif ne marche pas. Je te conseille de garder un aliquot (1.5ml) de tes bactéries avant de les lyser pour ta prep sur colonne. Fais une miniprep classique sur cet aliquot (lyse alcaline + isopropanol) et estime ton rendement en plasmide.  [...]