• Santé - Plasmide, Enzyme, Congélation

[Microbiologie] digestion de plasmide

j'ai digéré mon plasmide avec Ecor I j'ai inactivé l'enzyme par congélation à -20°C. j'aimerais bien savoir si l'inactivation pas congélation est réversible ou irréversible moi je pense qu'elle est réversible c'est à dire si je la met à 37°C elle va agir.  [...] A priori l'enzyme n'est plus protégée dans son buffer de conservation et la congélation pourra sans doute un peu l'abîmer. Cependant, vous avez raison, il restera une activité résiduelle très vraisemblablement non négligeable.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Ensuite, il n'est pas possible de mélanger toute les enzymes. Soyons fou, et admettons que tu veuille mettre ton plasmide et tes 6 enzymes en même temps. Tu va devoir choisir un tampon de digestion (ph, concentration en sel) unique pour toute tes enzymes. et certaines ne fonctionneront alors pas (enfin, il est possible une astuce, mais pas avec un choix restreint d'Ez).  [...] Le deuxième problème est la concentration en glycerol. Généralement, les enzymes sont suspendu dans un tampon coupé à 50% de glycerol, afin d'éviter les cycles de congélation/décongélation, qui abimeraient l'enzyme. Cependant, le glycerol est très mauvais pour l'activité de l'enzyme, et communément, ont admet que la quantité d'enzyme (+glycérol) ne dois pas dépasser 10% du volume total de digestion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution Rnase A

J'aimerai savoir si vous diluer l'ARnase A Sigma comme moi dans de l'eau ultrapure ou s'il est préférable de la diluer autrement.   [...] Pour la RNAse tu peux procéder de cette maniere, car c'est une enzyme tres resistante. Si tu souhaite eviter la congélation rajoute un peu de glycerole.  [...]

RT qPCR

Les enzymes se gardent à -20 dans leur solution stock, mais en réalité les protéines n'apprécient pas trop la congélation/décongélation et elles peuvent perdre leur activité enzymatique,  [...] Ce que Flying voulait dire, c'est que si vous avez mis l'enzyme, dans votre mix et que votre tube est retourné à -20, le glycerol est devenu minoritaire dans votre solution et votre enzyme dans l'eau ne va pas apprécier la congélation.  [...]

Les légumes surgelés

J'en pense qu'il ne faut pas oublier l'étape du blanchiment des légumes avant surgelation. Elle peut fortement réduire la teneur en vitamines sensibles à la chaleur comme la vitC, surtout quand les légumes sont en petits morceaux.   [...] Etant donné que le blanchiment est utilisé pour dénaturer les enzymes présentes naturellement dans le légume (et éviter des changements de goût, couleur ou texture durant la congélation), d'autres substances intéressantes peuvent être perdues comme le sulforaphane du brocoli (libérée par l'enzyme myrosinase lorsqu'on croque ou qu'on coupe du chou) qui augmente fortement l'activité des enzymes de phase 2 anti-cancer.  [...]

[Biochimie] La PCR et ses petis bugs

Si tu as changé les produits de pcr il se peut que cela vienne de ton ADN... L'extraction est peut être foireuse. Si tu travaille sur le mémé adn depuis le début il s'est peut etre dégradé (reste de dnase, congélation décongélation...).  [...] Pour la congélation/décongelation, on a effectivement eu un problème de congélateur, mais on a changer et le nouveau lot d'amorce et d'enzyme a été mis dans le nouveau congel, de plus on fait des aliquots pour eviter de sortir trop de fois les tubes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cryoconservation embryonnaire : comment les cellules repartent à la vie ?

Non car son fonctionnement est très faible voir inexistant quand tu gèles quelques choses, tu constates juste que la forme de la chose c'est un peu dégradé c'est ça le seul point négative de la congélation c'est que l'aspect, la structure par exemple d'une cellule sera mauvaise mais tout ce qui est interne en terme de molécule, d'organite, génome, enzyme etc... sera intact.  [...] Dire que la congélation n'a pas d'effet sur une cellule est a mon avis faux...On congèle pour garder on a pas le choix c'est certes utile mais pas totalement sans conséquence pour la cellule de par le stress que cela induit...Y'a qu'a voir le taux de mortalité a la décongelation en fonction du type cellulaire et de la methode de congélation utilisée pour savoir que c'est pas comme une douce pause pour les cellules.  [...]

[Biochimie] congélation et eau libre.

autre question si c'est possible ourquoi la congélation induit une exudation de l'eauest ce l'effet de la concentration ionique qui provoquera la plasmolyse de la cellule.  [...] La congélation induit une exudation de l'eau de part la formation de gros cristaux de glace qui provoque la plasmolyse de la cellule, maintenant cela dépend de la vitesse de congelation car plus elle est rapide moin il y'a formation de cristaux de glace volumineux et il n'y a donc pas de plasmolyse, et plus elle est lente plus les cristaux qui ce forment sont gros et il y aura donc plasmolyse de la cellule.  [...]

[Biochimie] Congélation : effet sur les enzymes

Par contre je peux te dire que la majorité des enzymes n'aime pas trop les cycles de congélations et de décongélations. La plupart, si tu les congeles puis si tu les décongèles, perdent leur repliement 3D et leur(s) activité(s). Pour palier à cela, on les place généralement dans du glycérol qui limite la diminution de l'activité.  [...] Dans ton cas des enzymes sont dans leur environnement naturel, donc tu pourrais faire une comparaison de leur(s) activités sans congélation et avec un cycle de congélation/décongélation.  [...]

[Biochimie] prélévements pour dosages parathormone

Soit environ 6-7 minutes entre le prélévement et la congélation. Quelqu'un a t il une idée/méthode pour aller plus vite (sans utilisation d'azote liquide...).  [...] Habituellement on considère qu'on dispose de 1h entre le prélèvement et la congélation du plasma (-20°C suffit pour un dosage jusqu'à 5j ap prélèvement).  [...]