• Santé - Plasmide, ADN, Solution

[Biologie Moléculaire] TP Extraction et electrophorese Sur GEL

J'ai un TP de biologie moléculaire à rendre demain.s dans ce qui conserne la méthode d'éxtraction de l'ADN plasmidique et l'analyse adn plasmidique sur gel d'agarose par electrophorese.  [...] =. je crois que l'adn chromosomique est une molecule de grosse taille,cela empeche qu'elle retrouve sa conformation(contrairement a adn plasmique).  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Que souhaitez vous faire exactement Trouver la masse d'ADN présent dans l'échantillon initialement Trouver la quantité d'un plasmide présent initialement dans la solution.  [...] J'ai compris comment déterminer la masse d'ADN présent dans la solution, à partir de la masse d'unités osidique. J'ai également compris comment déterminer la quantité de matière de plasmide à partir de la taille de celui-ci et je vous en remercie d'ailleurs car c'était pas gagné.  [...]

[Biologie Moléculaire] extractiobn d'ADN plasmidique

J'ai eu un question dans le TP de biologie moléculaire dans ce qui conserne la méthode d'éxtraction de l'ADN plasmidique et la détermination de la température de fusion c'est que c'est quoi le rôle du sel dans la solution.  [...] La soude est ensuite neutralisée par de l'acétate de potassium (KAc) 1M en concentration finale (ajout de 1.5V d'une solution de KAc 3M.). Ceci induit la renaturation des macromolécules. L'ADN génomique et la plupart des protéines sont des molécules trop grosses pour retrouver leur conformation native et toutes ces molécules établissent des liaisons les unes avec les autres, formant un précipité blanchâtre Le plasmide étant petit il retrouve sa conformation native, est exclu du précipité et reste en solution.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

[Microbiologie] Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)

On prend 10µL de cette solution soit 10*5 = 50ng de plasmide que l'on ajoute à 10µL d'eau, la nouvelle solution a une concentration de 2.5ng/µL ect...(Est-ce que j'ai bien expliqué le principe En fait je viens de me rendre compte en écrivant que je confondais les 50ng/µL avec les 50ng dans 20µL ce qui n'est pas du tout la même chose.  [...] En fait je me suis trompé au départ ce n'est pas une solution de 200ng/µL mais une solution contenant 200ng de plasmide. Pourquoi d'ailleurs partons nous de cette solution et pas directement de la solution contenant 100ng de plasmide (ce qui reviendrait à mélanger 2µL de la solution de départ avec 18µL d'eau).  [...]

[Génétique] plasmide ADN distinct de l'ADN chromosomique

j'ai pas bien compris la définition du plasmide,surtout quand ils disent que c'est une molécule d' ADN distinct de l'ADN chromosomique.  [...] Les plasmides sont des molécules d'ADN, généralement circulaires, et capables de réplication autonome, que l'on trouve surtout chez les bactéries. Ils existent dans le cytoplasme en plus du chromosome cellulaire (d'où le distinct dans ta définition) comme tu peux le voir ici.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb de mutagenèse dirigée

je travaille avec un plasmide type pcDNA3 de 4.5 Kb dans lequel g mis l'ADNc du gène du facteur Willebrand (8.9 Kb). l'amorce que j'utilise fait 30 b avec 15 bases de chaque coté de la mutation et elle a été commandée sur le site recommandé par Stratagene, donc je pense pas qu'il y ait un problème à ce niveau.  [...] mon problème est que je n'obtient pas de colonies avec mon plasmide recombiné, les témoins de mutagenèse et de transformation sont OK, j'ai bien des colonies bleues et blanches. mais les bactéries traitées avec mon plasmide ne poussent pas sur le milieu de culture LB+ampicilline quelque soit la quantité d'ADN ou de solution bactérienne étallée.  [...]

isolation d'un plasmide

Succintement voici les etapes d'une préparation de plasmide. On joue sur le fait que le plasmide soit une petite molécule d'ADN superenroulée.  [...] Tout agit avec tout. L'ADN plasmidique, plus petit et plus compact peut retrouver lui sa forme native et reste exclu du précipité. Dés lors, un étape de centrigugation permet de séparer le plasmide (et les petites protéines et des ARNs) restés en solution, du reste précipité au fond du tube.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- l'efficacité de transformation obtenue avec le produit de ligation. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec insert et ligase.  [...] - bruit de fond dû à l'ADN non digéré ou digéré par une seule enzyme. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec la ligase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation levure

afin de transformer des levures avec un plasmide linéarisé+cDNA pour le recombiner, on a ajouté de l' ADN dénaturé (de thymus de veau) pour favoriser la transformation. Cet ADN aurait une fonction de carrier, mais je ne comprends pas trop comment ça marche, si qlq un peut m eclairer.  [...] cet ADN protège ton plasmide de la dégradation, car il est beaucoup plus abondant que le plasmide. Donc les nucleases vont en premier le dégrader.  [...]