• Santé - Plasmide, ADN, Origine, Réplication, Bactérie

[Biologie Moléculaire] Maxi-prep avec rendement très faible

Je viens à vous car depuis pas mal de temps je suis confronté à un problème assez embêtant. il se trouve que de nombreuses maxi-prep que j'effectue ont un rendement très faible (masse finale de 40ug). J'ai pu remarquer que je n'obtiens ces rendements que pour des bactéries possédant le plasmide pCDNA3 (indépendemment de l'insert).  [...] Je m'auo réponds. en fait mon plasmide possède une origine de réplication pbr322 en faisant un plasmide a faible copie dans chaque bactérie. donc je dois suivre les protocoles pour les plasmides low copy, ce que je ne faisais pas.  [...]

[Génétique] Plasmide

Oui mais cela dépend plutôt de l'intégration d'un seul plasmide ou de plusieurs plasmides différents dans la bactérie, pas du caractère auto-réplicatif, de prime abord. Pour ce qui est du nombre de plasmides par bactérie, cela dépend de la force de l'origine de réplication.  [...] En faisant pousser sur un milieu avec l'antibiotique, celles sans plasmide meurent. Mais si vous oubliez de mettre l'antibiotique dans le milieu (ou que celui ci est périmé ) les plasmides vont rapidement disparaitre. La réplication du plasmide coute de l'énergie, hors la gestion de l'énergie est un point critique chez les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Les plasmides

Je m'interroge sur mon cours de biologie moléculaire et notamment sur les plasmides. Je me demandais si un ADN pouvant se répliquer chez une bactérie pouvait s'y maintenir pareil chez l'eucaryote ( là j'ai des doutes mais je ne sais pas comment l'expliquer).  [...] Ils sont composés d'une origine de réplication qui permet la réplication d'une plasmide sans entraîner le chromosome bactérien à se diviser (gain d'énergie) et ont très souvent un gène qui code pour un antibiotique ce qui permet aux bactéries de lutter contre les pathogènes de l'environnement.  [...]

Préparation d'ADN plasmidique

Calculer le volume V qui a été utilisé au début de l'expérience pour préparer une quantité totale de 10ug d'ADN plasmidique dans 1mL.  [...] 1unité de DO=10^9bactéries. l'ADN est plasmidique. temps de regénération de la culture =37min. taille plasmide=2,7kb. taille d'une bactérie=1*0,4um². nombre de copies du plasmide dans la bactérie=500. nombre avogadro=6.10^23.poids moléculaire d'un nucléotide=330.  [...]

Plasmides

Oui les plasmides ont une origine de réplication propre. Ils se répliquent dans la bactérie individuellement de l'adn génomique de celle-ci. Lorsque la bactérie se divise, les plasmides se répartissent au hasard dans les deux cellules filles. Ils ont une vie propre et apportent à la bactérie des gènes compémentaires à celle-ci, comme des gène de résistance à un antibiotique.  [...] pourquoi l'insertion d'un plasmide réplicatif est létal ça ne dépend pas de son origine de réplication. Les plasmides de bactéries ont une ori 2µ non et ils se répliquent.  [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

Le chloramphenicol comme Flying le propose, permet d'empecher ta bactérie de se diviser, mais sans empecher la réplication du plasmide, tu peux donc laiser plus longtemps (pour avoir pus de plasmide) sans saturer en bactérie car elles arretent de se mutiplier quand tu ajoute le chloramphenicol,  [...] J'étais justement en train de faire des recherches sur l'ajout de chloramphenicol mais c'est recommandé pour les plasmides ayant une origine de réplication pMB1 ou ColE1. D'après la carte de mon plasmide, ce n'est pas le cas (quoique je m'interroge quand même car il a une pUC ori donc s'agit-il d'une origine pMB1 J'ai l'impression que j'ai trop de lacunes dans mes connaissances.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation chez la bactérie ?

Je voudrais savoir après qu'une bactérie ait été rendue compétente, comment le fragment d'ADN est intégré dans le chromosome bactérien.  [...] Mais pour être sûr d'avoir bien compris, quand il s'intègre par hasard (donc pas de recombinaison homologue) cela signifie que si le chromosome bactérien a une taille de 100 bp (je sais que c'est beaucoup trop petit mais cela n'a pas d'importance ici) et que le fragment d'ADN à incorporer possède une taille de 10 bp, alors la taille finale sera de 110 bp (et non de 100 bp comme cela serait le cas s'il y avait recombinaison homologue).  [...]

Recette du clonage | Dossier

Il y a plus de vingt ans, on a découvert que des morceaux d' ADN en forme d'anneaux peuvent se perpétuer au sein de bactéries. On les appelle plasmides. A la différence des virus, ils ne peuvent pas sortir de la cellule pour vivre une vie autonome.  [...] Autrement dit, un plasmide est une sorte de virus qui ne peut vivre qu'à l'intérieur d'une bactérie ou d'une cellule comme un morceau d'ADN indépendant. Il se multiplie au fur et à mesure que la cellule ou la bactérie se multiplie. Les généticiens utilisent les plasmides comme un outil capable de multiplier à volonté (ou cloner) des morceaux d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

Je ne pourrais pas affirmer que tous les procaryotes n'ont qu'une seule origine de replication mais en tout cas E.coli (bactérie représentative et très étudiée) n'a qu'une seule origine de réplication.  [...] Les études réalisées avec le plasmide ori C permettent de comprendre quelles sont les étapes de l'initiation à l'origine de réplication de E.coli. Schématiquement, ces étapes sont.  [...]

[Génétique] exprimer une protéine dans E.COLI

Ensuite, tu l'insert dans un plasmide, possédant une origine de réplication E.Coli, avec un gène de sélection (ex.. Résistance à lampiciline).  [...] Mais, tu va devoir modifier ton transcrit d'ADN c de départ pour par exemple utiliser les ARNt que la bactérie utilise le plus souvent, et aussi, tu peux, par PCR, ajouter une séquence à ton plasmide permettant de secréter la protéine dans l'espace périplasmique ou extracellulaire.  [...]