• Santé - Migration, Charge, Protéines

[Génétique] Génotype Phénotype souris électrophorèse

Bonjours à tous voilà j'ai un exercice de SVT je n'ai pas de problème à trouver les réponses mais j'aimerais juste connaitre la signification d'un mot dans cet exercice. En effet je n'arrive à trouver ce que signifie ce mot et par conséquent à savoir ce que l'on me demande.   [...] Après application d'un champ électrique, les molécules migrent et sont séparées en fonction de leur taille, et de leur charge. Un colorant révélant les protéines permet de mettre en évidence 3 molécules différentes. La forme L à migration lente, la forme R à migration rapide et la forme M à migration intermédiaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Conclusion. On peut produire des protéines en DH5alpha grâce aux vecteurs pGEX. Cependant la dégradation induite par les protéases ne semble pas négligeable. Le represseur LacI q du vecteur n'eteint pas totalement l'expression du gène chimère. Peut être un problème à prendre en considération pour les protéines toxiques.  [...] Tu as essaye de deposer moins de proteines souvent si la charge est +++ ca fait des trucs tres bizarre durant la migration et le WB.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

Le Sds est un détergent ionique qui donne aux polypeptides une charge négative uniforme par unité de longueur. Les charges propres de la protéines n'interviennent alors plus. La charge de l'ensemble molécule dénaturée/SDS (et donc sa vitesse de migration) dépend alors uniquement de la longueur de la chaine protéique.  [...] Ici, je fais une électrophorèse en condition dénaturante = avec SDS (et chauffage). Le SDS a la propriété de charger toutes mes protéines présentes dans le mélange négativement. Est-ce que dans ce cas mes protéines migreront selon leur taille, selon leur charge ou selon les deux.  [...]

[Identification] Electrophorese et isoelectrophorese

La migration se fait sur un gradient d'ampholines (molécules amphotères) qui créent un gradient de pH. Les protéines migrent jusqu'a rejoindre lur point isoélectrique ou pHi pour lequel leur charge globale nette est nulle.  [...] Donc si j'ai bien compris l'électrofocalisation, l'isoélectrofocalisation et l'isoélectrophorese sont des synonymes et c'est une électrophorese qui se fait dans un gradient de pH. Es ce exact.   [...]

[Biochimie] Tampon de charge

Il parait que j'ai un problème de migration de mes protéines (SDS-PAGE). Est ce que je dois arrêter forcément l'électrophorèse quand la ligne bleu (du tampon de charge) atteint le front bas des plaques de verre.  [...] ps. le générateur de courant que j'utilise est ancien type BIO-RAD 500/200 power supply. Et je ne suis pas sur que l'aiguille indique le voltage désiré.   [...]

Electrophorèse acétate de cellulose

En l'occurrence justement, quel serait le sens de migration des protéines à un pH de 8 (pH du TAE), sont-elles chargées positivement ou négativement (je suppose que cela peut varier en fonction des protéines).  [...] Du coup, la migration se ferait à la fois selon la taille et la charge des protéines Ou, si l'on considère que leur charge est la même, uniquement en fonction de leur taille.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Ceci entraîne la suppression des structures secondaires, tertiaires et quaternaires des protéines permettant ainsi une fixation du SDS sur ces protéines et donc de les charger négativement (transformation en anions). La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge.  [...] Dans chaque puits il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 90 µl de la fraction membranaire et 100 µl de la fraction cytoplasmique. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vrai ou faux : Daltons et taille moleculaire

En SDS page, tu es en conditions dénaturantes. La densité de charge dans les protéines est considérée comme constante. Quand tu appliques un champs électrique, une protéine plus grande subira une plus grande force, mais il ne faut pas oublier qu'elle sera aussi plus lourde.  [...] Dans un SDS PAGE tu dénature la protéine qui devient dès lors linéaire. Mais tu ajoutes aussi du SDS qui est un détergent ionique qui va charger négativement l'ensemble de tes protéines. Du coup, la charge globale intrisèque de la protéine n'entre plus en jeu dans la migration, seule la taille compte.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge. L'électrophorèse a pour but de séparer les protéines sur un gel de polyacrylamide, ensuite ce gel est mis en contact avec une membrane de nitrocellulose et un courant allant du gel vers la membrane ce qui permet de fixer les protéines contenues dans le gel sur cette membrane.  [...] Dans chaque puits, il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 110 µl de la suspension. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] Je viens de refaire un gel avec des tampons d'une collègue ainsi que son tampon de charge qui fonctionnent très bien ensemble. Mais visiblement dans mes mains non. J'ai toujours un front de migration flou et des bandes de protéines pas très nettes... *PAN*.  [...]