• Santé - Méthode, Précipitation, Cellules

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Pour la méthode de précipitation on a centrifugé les cellules pour avoir un culot des cellules. Ce culot a été disperser au maximum à l'aide d'un vortex. Le trizol a été ajouté sous une haute chimique à température pièce, on a vortexé pour homogénéiser, les étapes subséquentes ont été effectuées à température pièce jusqu'à l'ajout d'isopropanol où une incubation dans la glace de 10 minutes a été effectuée.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Autre chose, l'ARN est très fragile et facilement dégradable. Donc, cela ne gène pas la manipulation, il y à relativement peu d'ARN, même si on peut en obtenir pas mal quand on le désire mais avec cette méthode, on ne favorise pas l'ARN. Mais encore une fois tout dépend, à mon avis, du but de l'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfection Calcium Phosphate

Sur cette page, tu as 6 protocoles de transfection avec cette méthode. Sinon tu as aussi la possibilité de transfecter avec un polymère cationique comme le polyethyleneimine (PEI). Personnellement je transfecte avec cette méthode et ça marche très bien. Le mieux est que le PEI que j'utilise n'est pas sous forme de kit, c'est une fiole avec 100 ml de PEI, de quoi faire des transfections pendant plus de 50 ans et je n'exagère pas.  [...] Peut-être pour vérifier que les problèmes viennent des cellules et pas de la méthode, tentez de transfecter une autre lignée comme les CV1, MCF7, etc pour lesquelles ça marche.  [...]

Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse

Pour chaque méthode je dois calculer la quantité de protéine voulue obtenue et les pertes survenues au cours de la purif (sachant que je connais la quantité initiale).  [...] salut à toi. J'ai le même exercice que toi à faire et moi je bloque sur la deuxième méthode à savoir la chromatographie échangeuse d'ions. te sers tu de la valeur de l'absorbance à 280nm pour calculer le poids de fétuine utilisé pour l'électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions de Biologie moléculaire

3* En ce qui concerne la visualisation de l'ADN je connais la coloration au bromure d'éthidium qui se fixe à l'ADN double brin et devient fluorescent lorsqu'il est exposé aux rayonnements UV.   [...] 4*La précipitation des acides nucléiques peut se faire à l'aide de l'éthanol ou l'isopropanol, la différence réside dans le fait que la méthode à l'éthanol nécessite la présence de sel et la précipitation se réalise par addition de deux volumes d'éthanol à un volume de la solution, alors que la méthode à l'isopropanol ne nécessite pas la présence de sel et la précipitation se fait par un mélange volume à volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN total sur fourmi unique

je cherche à extraire l'ARN total à partir d'une fourmi unique, dont je dois tirer 4-5 µg. J'utilise la méthode Trizol-chloroforme, mais j'ai toujours un problème de pureté, spécifique à la fourmi. J'ai un pic d'absorbance à 220-230 nm, dont je n'arrive pas à me débarrasser.  [...] J'ai lu qu'une précipitation au Chlorure de Lithium (LiCl) permettait d'éliminer certains contaminants, l'un d'entre vous aurait-il un retour d'expérience sur cette méthode Ce sera en tout cas ma prochaine étape.  [...]

Membrane, enveloppe, paroi?

II)Coloration à base d'iode (-). permet d'entrer dans toutes les cellules, entre en contact avec le cristal violet chargé (+) = précipitation (le cristal violet sera alors piégé dans les cellules et plus stable).  [...] Les Gram(-) ont une fine couche alors condensée par l'alcool, celui-ci va réussir à rentrer cette fois-ci et solubiliser le cristal violet et il va donc pouvoir sortir et rendre sa transparence à la cellule, suite colorée en rouge.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

En ce qui concerne l'extraction d'ADN, sous quelle forme on obtient notre ADN vers la fin du protocole d'extraction (precipitation à l'éthanol).Autrement dit, est-ce qu'on est obligé d'obtenir de l'ADN sous forme de pelote ou bien ce n'est pas toujours le cas.  [...] Dans cette méthode oui, tu obtiendra toujours de l'ADN sous la forme d'une pelote. Car il y a formation d'un précipité. Après je ne sais pas si il y a d'autre méthode permettant d'extraire de l'ADN sans précipitation de celui-ci.  [...]

précipitation proteine

J'ai vu dans bcp de papier, que pour purifier une RNA polymerase, il fallait aprés lyse des cellules faire une précipitation à la polymin-P suivie d'une précipitation au sulfate d'amonium. Je me suis un peu renseigné et la polymin-P (Polyethylenimine) me semble surtout capable de precipiter les ADNs.  [...] a ceux que ca interesse, la polymin-P permet de detruire les membranes des gram-. Elle permet aussi de precipiter les ADNs et tout ce qui est fixé dessus et donc dans mon cas, la RNA pol vu qu'elle n'existe pas ou trés peu libre dans la cellule.  [...]

[Identification] Trypsinisation avant 2D-LC-MS/MS : CaCl2 ?

Dans mon protocole de trypsinisation de solution, j'utilise du PPS (pour ses propriétés détergentes compatibles MS/MS) et CaCl2 (1mM). Mais je ne comprend pas pourquoi j'utilise du CaCl2.   [...] Ps. Je travaille sur des cellules d'Arabidopsis thaliana, j'ai fait l'extraction protéique par précipitation au TCA (j'ai utilisé de l'urée comme détergent). Après ma trypsinisation, je fais du 2D-LC-MS/MS.  [...]