• Santé - Marquage, Fluorescent, Anticorps

Conservation des anticorps précédent immunofluorescence

J'utilise des anticorps pour reconnaitre certains compartiments endosomal de macrophages. J'effectue un double marquage en utilisant ces anticorps dans un premier temps puis des anticorps fluorescent par la suite.  [...] PRIMAIRE et SECONDAIRE, et pas de bruit de fond. Mes primaires vont de 1/500 pour un anticorps donné mais le max que j'utilise c'est 1/2000. Il s'agit surement d'anticorps très spécifique car j'ai mes structures très bien marquées. Pour le secondaire, j'utilise toujours 1/500 en dilutions quelque soit le primaire =).  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquer un anticorps

Sinon, j'me demandais si l'utilisation d'un 2nd anticorps (reconnaissant l'Ac spé) ne serait pas aussi utile que de marquer directement l'Ac spé. Merci à vous.  [...] ouai bein c'est à ce dont je pensais en fait, marquer le premier anticorps par un deuxième ayant des propriétés fluorescentes ( tyrosine/ trypto/ phénylala ).  [...]

Immunomarquage de la rétine du macaque

puis on utilise un anticorps polyclonal anti la protéine d'interet, on rince et on met l'anticorps secondaire anti- anticorps de lapin, marqué par un marqueur fluorescent, dilué dans du PBS contenant 1% d'albumine de sérum bovin pendant 1h à température ambiante.  [...] On rince de nouveau, puis anticorps secondaire anti-IgG de chèvre (provenant du lapin cette fois). Vu que celui ci marque la fin des réactions, pas besoin de saturer après avec un sérum de lapin.  [...]

[Biotechnologie] Test immuno-enzymatique... ELISA

On ajoute un deuxième anticorps qui se lie spécifiquement au premier anticorps. Le deuxième anticorps est marqué par un produit fluorescent, une espèce radioactive,... On peut aussi lui attacher une enzyme qui transforme un substrat (la molécule qu'on lui donne) en un produit détectable.  [...] Tu as plein de variations possibles, pour attacher la protéine à détecter (on peut aussi utiliser des anticorps liés à la plaque de test), pour utiliser un ou deux anticorps (si on n'utilise qu'un anticorps, on attache directement le marqueur à cet anticorps), mais c'est toujours à peu près le même principe.  [...]

[Divers] Adhésion d'un peptide au plastique

Ce peptide n'est pas immunogène, je ne peux donc pas le marquer avec un anticorps fluorescent (par exemple).  [...] le peptide n'est pas immunogène (incapacité à induir une réponse immunitaire) c'est donc un hapténe mais ils est surement antigénique c'est à dire qu'il peut surement être lié par un anticorps. En couplant ce peptide à une plus grosse molécule et en immunisant une sourie par exemple vous allez forcément faire produire à la sourie des anticorps dirigées contre votre haptène.  [...]

immunofluorescence

les 3 techniques sont bien utilisées toutes les 3 en elisa. celle en sandwich consiste a coaté une plaque avec un anticorps. ensuite tu rajoute ton antigène qui va se fixer a ton anticorps. tu rajoute ensuite un autre anticorps marqué avec un marqueur fluorescent qui va se fixer sur un autre épitope de ton antigène. tu n'as plus qu'à lire les résultats.  [...] En sandwich peut également être pour faire de l'immunolocation avec un anticorps fluorescent couplé a le GFP en N-terminal et DsRED en C-terminal par exemple... le tout pour étudier une protéine qui subit un clivage, exemple. la nucléoline... et ainsi suivre dans quel partie de la cellule elle est clivée (Noyau, nucleole, mitochondire ou autre.  [...]

schéma moléculaire

je prends pour exemple un anticorps représenté par un Y couplé à un marqueur fluorescent représenté lui par un rond à la base.  [...] dans le cas de molécules simples, l'eau peut être représentée par une tête de Mickey avec des ronds de 2 couleurs différentes correspondant aux molécules d'hydrogène et d'oxygène.   [...]

Les résultats déjà obtenus | Dossier

Coupe en immunohistochimie de myotudes (cellules musculaires) provenant de souris saines ou de souris mdx. La présence de dystrophine est révélée par un anticorps dirigé contre la partie terminale de la protéine. Le marqueur fluorescent rouge utilisé pour cette détection est la rhodamine.  [...] Les résultats montrent qu'après le traitement à la gentamicine, il est de nouveau possible de mettre en évidence la présence de la dystrophine dans les muscles (10 à 20% de la quantité normale), que ceux-ci sont moins fragiles, qu'une certaine activité est retrouvée et que le niveau de CK dans le sang est significativement diminué indiquant une meilleure résistance des cellules musculaires (18).   [...]

[Immunologie] Immuno-marquage

C'est basé sur le système antigène-anticorps. Imaginons qu'on veuille marqué une cellule X qui présente des protéines Y sur la surface. Et bien on va pouvoir utiliser des anticorps de Y qui vont naturellement se fixer dessus..marquant ainsi la cellule X. Les anticorps sont des immunoglobines spécialement sécrétées pour se fixer sur la protéine Y.  [...] Donc on va profiter de cette affinité pour marquer des protéines cibles. Mais pour qu'on puisse voir, on fixe sur les anticorps des marqueurs. Alors ça peut être un marqueur radioactif par exemple, ou un marqueur fluorescent comme ça au microscope on repère bien la protéine cible.  [...]

[Biotechnologie] cytométrie de flux/épifluorescence

Je pensais que la cytométrie de flux est la technique qui permet de faire passer les micro-organismes sous le microscope à fluorescence.  [...] la cytometrie de flux est une technique qui permet de détecter la taille, la granulosité d'une cellule ainsi que la fluorescence de protéines cellulaires (protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome) ou de l'ADN (ex intercalant fluorescent de l'ADN).  [...]