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[Biologie Moléculaire] Manipulation de laboratoire - Extraction d'ARN

J'étudie l'effet des corticostéroïdes utilisés pour traiter l'ostéoarthrite sur ces ménisques. Dans mes manipulations, je tente d'extraire l'ARN des cellules méniscales dans le but d'analyser si des gènes tels que ceux du collagène ou de l'aggrecan subissent une modification de leur expression.  [...] Voilà les détails. Maintenant, en pratique, j'extrais l'ARN en utilisant le protocole du Tri-Réagent (par Sigma-aldrich). Mon problème est tout à la base de la manipulation. je n'arrive pas à transformer les ménisques en solutions. J'ai tenté de les mettre dans l'azote liquide et de les broyer avec un pilon mais ils sont tellement dur que ça durcit encore plus mais ça ne se casse pas en poudre.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...] Autre chose, l'ARN est très fragile et facilement dégradable. Donc, cela ne gène pas la manipulation, il y à relativement peu d'ARN, même si on peut en obtenir pas mal quand on le désire mais avec cette méthode, on ne favorise pas l'ARN. Mais encore une fois tout dépend, à mon avis, du but de l'extraction.  [...]

Des OGM maison ?

Avec l'évolution des différentes méthodes d'extraction de l'ADN et de manipulation génétique, je me demandais, au delà de toute considération éthique, s'il était aujourd'hui envisageable de modifier génétiquement des organismes simples (du genre e. coli) en leur injectant des gènes déjà connus et séquencés, dont la fonction est bien identifiée, le tout avec un faible budget (quelques centaines d'euros tout au plus) et du matériel de laboratoire de base.  [...] Pour ce qui est de l'insertion d'un gène, cela me semble plus délicat, mais peut-être qu'une méthode serait réalisable avec du matériel simple et des échantillons en quantité suffisante, de manière à ce que le gène s'insère à un endroit où il pourra être exprimé, à condition toutefois de pouvoir identifier les cellules pour lesquelles la manipulation a bien fonctionné.  [...]

Transfert de cellules souches cancéreuses

.. ). D'autant plus que nous possédons l'exemple d'autres animaux (cf ci-dessus) où la contagion interindividuelle existe... Cela pourrait amener à reconsidérer les précautions à prendre en laboratoire et en clinique pour la manipulation d'échantillons tumoraux.  [...] Cela pourrait amener à reconsidérer les précautions à prendre en laboratoire et en clinique pour la manipulation d'échantillons tumoraux. Néanmoins à relativiser car si les oncologues cliniciens était plus sujet à cancer que le reste de la population, ça se saurait.  [...]

[Immunologie] On nous ment ou pas?

- 2 paires de gants pour limiter au maximum le risque de contamination accidentelle via la manipulation du matériel habituel en laboratoire (pipette, cône, seringue, boites,...), mais aussi si on a une blessure sur la peau / stérilité.  [...] En laboratoire les conditions de production sont optimisées, la charge virale potentielle est donc fortement multipliée et de là le risque d'infection aussi, d'où les précautions prises (non superflues et à ne pas confondre avec un contexte naturel de dissémination/infection).  [...]

[Biologie Cellulaire] Isolement d'un compartiment cellulaire

-c'est une technique de séparation des différentes parties d'une cellule au moyen d'une homogénéisation puis d'une centrifugation differentielle pour donner des fractions nucléaires, mitochondriales, microsomale et des fractions solubles.   [...] Ma collègue réalise une ultra-centri à la suite de laquelle elle récupère la fraction light membrane (+1 tampon de lyse) (marqueur. dynéine) et la fraction cytosol (marqueur caspase 3).   [...]

Condition Rnase-free ...

La condition RNAse free, vu le nom... je pense que c'est simplement le fait d'avoir des ARN dans un milieu garanti sans RNAses, c'est à dire les enzymes qui digèrent l'ARN. En effet, dans un être vivant, les ARNm n'ont aucune raison de vivre longtemps. il faut que leur population reflète fidèlement l'expression des gènes dans le noyau.  [...] Les cones (pour les pipettes) ne doivent pas avoir ete manipulés avec les mains (mieux vaux utiliser des cones specifiquement pour cette utilisation). Il est souvent conseille de porter des gants bien que je sois septique sur l'interet de cette pratique. Sinon l'eau, est une bonne source de contamination prendre de l'eau traitee au DEPC.   [...]

Différence SVF décomplémenté/SVFi

actuellement technicien de laboratoire dans un laboratoire de développement de vaccins je suis amené à travailler sur des cellules et les mettre en présence de virus. J'ai été désigné pour mettre en avant une détérioration de profils d'une manipulation (Séroneutralisation) au cours du temps.  [...] Merci de ta réponse si rapide. J'ai fais des recherches en parrallèle et en effet il semblerai bien que l'irradiation ne compense pas de la décomplémentation. Je tiendrais quand même informé si j'ai des infos supplémentaires ou confirmation par les données du laboratoire. Encore merci.  [...]

extraction des protéines par le Tris-HCl

Je suis à la recherche du rôle de la concentration du solvant Tris-HCl dans l'extraction des protéines dans le coeur de dinde (un tissu ) j'ai fait une manipulation d'extraction par le Tris-HCl 1M / 2M et 3M et j'ai trouvé les résultats suivantes.  [...] pour appuyer la réponse de vpharmaco. l'extraction de protéines est un truc relativement variable dans la quantité obtenue même avec le même tissu de départ. Avec une mesure par condition et de tels résultats on ne peut absolument rien conclure.  [...]

[Biologie Moléculaire] BET ou Bromure d'Ethidium...quelles aternatives ?

Je suis technicienne de laboratoire débutante et je trouve que dans le laboratoire où je me trouve il n'y a pas assez de précautions pour la manipulation de l'intercalant sybr safe. On utilise des gants en latex, qui a mon avis peuvent se percer au cours des manipulations.  [...] Dans le laboratoire ou j'ai effectué l'un de mes stages cette année, mon encadrant m'a montré la révélation sur gel avec le BET. Il prépare son gel d'agarose ave tampon TAE, et pour le refroidir il lui met de l'eau froide. Ensuite, quand il a considéré que c'était ''moins chaud'' il décida de mettre les quelques gouttes de BET dans le récipient.  [...]