• Santé - Localisation, Protéine, Intérêt

[Biologie Cellulaire] Marquage GFP

si tu couples ta protéine d'intéret à la GFP, tu peux la suivre dans la cellule, qd elle se ballade du noyau au cytoplasme par exemple.  [...] Tu n'introduis pas la GFP seule, mais un gène codant une protéine de fusion GFP. Ainsi, ta protéine d'intérêt et la GFP étant lié covalement, en suivant la localisation de la GFP tu suivras la localisation de ta protéine d'intérêt.  [...]

fusion transcriptionnelle et traductionnelle

la fusion traductionnelle est une fusion de gênes effectuée dans leur partie codante et respectant les cadres de lectures. Permet d'obtenir une protéine chimère. cette technique permet par exemple de faire une fusion entre un gène d'intérêt ( qui code pour une protéine d'intérêt ) et le gène qui code pour la GFP.  [...] à propos d'une fusion traductionnelle, j'imagine qu'on peut l'utiliser pour isoler une protéine d'intérêt ou bien réaliser une fusion entre une protéine d'intérêt et la GFP ( pour visualiser et localiser le chemin emprunté par la protéine dans la cellule ) je me trompe.  [...]

[Immunologie] Fixation pour immonofluorescence

Par contre ils restent visibles dans les cellules transfectées avec les plasmides contenant mes gènes d'intérets. J'ai peur que les méthodes de fixations utilisées n'entrainent une relocalisation cellulaire de mes protéines.  [...] Le plasmide vide signifie qu'il n'y a que la GFP. Donc la GFP est exprimée seule, pas en fusion avec la protéine d'intérêt. Cela fournit un contrôle indispensable pour montrer que les conditions utilisées n'affecte pas la localisation de la GFP, et donc prouver qu'une relocalisation éventuelle de la protéine de fusion GFP-X est spécifique de la protéine X.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Je ne comprends pas aussi comment la localisation de la protéine peut elle débuter dans une cellule et se propager à l'organisme entier, c'est à dire que si on injecte le transgène dans une cellule donnée de l'embryon,comment va t il alors se retrouver dans une partie de ce dernier (serait ce due à la mitose asymétrique).  [...] si je comprends bien, si l'on veut connaitre la localisation de la protéine d'intérêt avec une séquence régulatrice(recombinaison homologue), il faut forcément que le transgène possède une séquence d 'ADN de localisation (ex.NLS qui soit identique à la séquence d'ADN de localisation de la protéine d'intérêt) et le gène rapporteur.  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Pour étudier la localisation de l'expression d'un gène (à l'échelle cellulaire, pas subcellulaire), quel est l'intérêt de l'hybridation in situ par rapport à l'utilisation d'un rapporteur sous contrôle du promoteur de ce gène (ou l'intérêt de cette dernière technique par rapport à la 1ere).  [...] Ca depend comment est realisee la fusion, il est possible de faire une fusion traductionnelle du gene rapporteur avec la proteine d'interet afin de detecter la localisation de celle ci. Dans ce cas, il est recommande de transformer une telle construction dans un mutant pour le gene d'interet afin de voir si la proteine de fuision complemente le phenotype (un tres bon controle).  [...]

[Biologie Cellulaire] Synthèse de la Cycline D

Cependant, on a aussi dit que la cycline D est une protéine cytoplasmique et pourtant j'ai l'impression que tout se passe dans le noyau de sa synthèse a sa participiation a G1.  [...] Une rapide recherche sur internet m'indique que le complexe cycline D/cdk a une activité kinase. il agit en phosphorylant d'autres protéines, notamment la protéine Rb. C'est tout à fait compatible avec une localisation cytoplasmique de la protéine.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 26

(Si tu observes bien, tu verras que la forme de la cellule ne change pas, ce que tu vois est une différence de localisation d'une protéine à l'intérieur même de la cellule, on appelle ça une localisation polarisée ).  [...] ah j'avais l'impression que la cellule s'étirait (forme allongée avec un pôle plus coloré) puis s'allongeait (forme ronde entièrement colorée). Donc selon toi la cellule garderait la forme en batonnet (dernière image), et la fluorescence serait due uniquement à un mouvement d'une protéine. à l'intérieur ou à la surface de cette cellule.  [...]

[Biochimie] Prediction de structure dume proteine native et sa forme mutee

Si une proteine native implique une modification co traductionnelle. qui est la N myristoylation par contre la forme mutée manque le site de myristoylation. Quelle peut etre la consequence de l'absence de cette modification au niveau de la protéine mutée.  [...] La N-myristoylation intervient le plus souvent dans l'ancrage de protéines aux membranes, donc cela peut modifier la localisation cellulaire de la protéine en question. Elle peut aussi impacter la stabilité de la protéine et donc sa demi-vie.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine Iba-1: localisation intracellulaire ou membranaire chez la microglie?

Depuis un moment maintenant, je me pose la question de la localisation de cette protéine Iba1 (ionized calcium binding adaptor molecule 1) au niveau des cellules microgliales. Connu pour être l'un des marqueurs spécifiques de ces cellules et des macrophages, j'aimerai vraiment savoir dans quel compartiment elle se trouve.  [...] En dehors de la localisation de son gène, je n'ai pu trouver aucune information concernant la protéine. Je n'ai également rien trouvé sur des publications.  [...]

coloration de proteine et observation au microscope

je travaille dans un labo de recherche, et apres coloration d'une proteine donne nous avons pu voir quelle forme de minuscule petits points dans la cellule.  [...] Déjà, est ce que le marquage est spécifique et validé Après, ca peut être effectivement dans des lysosomes, des vésicules de sécrétion, etc... Mais pour le savoir, il faut changer de méthode. co marquage, MET, etc. Connaitre la protéine peut déjà aider. signal de localisation protéine sécrétée des partenaires d'interaction connus.  [...]