• Santé - Levure, Système, Protéine

au secours je suis larguée!!

La méthode double hybride est la méthode qui utilise la levure comme système poour démontrer une interaction protéine protéine.  [...] Le crible double-hybride inverse consiste à rechercher des protéines mutantes ayant perdu la capacité d'interagir entre elles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'expression de prot invitro (cell free)

Je dois produire une protéine grande environ 160 kDa avec un système de production transcription / traduction provenant de mais, homme, lapin et bactérie. Me protéine est une protéine de levure.Voilà ce que je pensais faire.  [...] Ma question est la suivante. Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce genre de kit pour un application similaire (grande protéine - GST - et levure) Si oui lequel avez vous utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Récepteurs NMDA

- Les ADNc ne sont pas intégrés au génome chez les cellules eucaryotes. Donc l'expression de protéines à partir de cet ADNc est temporaire. De même avec les ARN, qui seront forcément dégradés.  [...] pour la levure, systeme euk, donc les modifications post-traductionnelles existent. par contre les proteines peuvent etre plus difficile a purifier.  [...]

[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Le RNAi ne marche pas chez la levure, alors coté systeme inductible il y a en effet le systeme TET qui active ou inavite le promoteur en présence de tetracycline, mais le systement le plus utilisé est le promoteur GAL, qui est fortement induit en presence de galactose et en absence de glucose.  [...] le probleme que j'ai un production de ma proteine mais elle reste toujours dans la levure et ne sorte jamais.c'est dans les tois types de plasmides.  [...]

Projet clonage et expression d'un gène

Pour mes études j'ai comme projet de cloner et d'exprimer un gène codant pour une protéine membranaire. Le mieux serait d'utiliser comme hote E. Coli.  [...] Chez la levure, il y a un papier qui est sorti l'année dernière sur un système d'expression simple et efficace des protéines membranaires. Rapid expression screening of eukaryotic membrane proteins in Pichia pastoris.  [...]

[Biologie Moléculaire] Etude de la topologie des protéines membranaires

J'avais fait ca avec le systeme phoA (pQuantagen(xk) vector (Qbiogen, Illkirch, France). Il suffit de faire des proteines de fusion avec phoA, de les exprimer et de suivre la couleur de la bacterie (peut etre que ca marche aussi chez la levure) en presence d'un reactif colore.  [...] Merci Gorben pour ta reponse, en effet come tu l'as deviné c'est effectivement pour une proteine de levure que je pose la question, j'avais oublié de préciser cela.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Pour exprimer le systeme chez la levure, ca m'a l'air un peu chaud. Il te faut sspB (adaptateur) ainsi que clpP (protease). Il te faut aussi le tmRNA. Bref ca fait beaucoup de chose a exprimer correctement (puis surtout la surexpression d'une protease je suis pas sur que ce soit une bonne idee).  [...] De plus, ils surexpriment Arc via un plasmide, ca ne m'etonnerais pas qu'ils sur expressent Arc au point de saturer le systeme et donc d'avoir pas mal d'Arc soluble et dans le cytoplasme. Du coup la degradation initiale est probablement juste la degradation de la proteine soluble.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

On a appelé la séquence UAS pour upstream activating sequence. La protéine GAL 4 se fixe sur la séquence UAS et déclenche la transcription par l'ARNpol. Les chercheurs ont pensé que cet ensemble facteur de transcription + séquence UAS pourrait être un bon système rapporteur.  [...] Chez la droso, ce système est beaucoup utilisé. On dispose aujourd'hui de nombreuses souches de drosophile dites Gal 4. Il s'agit de souches où la protéine GAL 4 est exprimée dans différents tissus, parfois dans un nombre très réduit de cellules ( neurones, cellules musculaires, tégumentaires...) sous le contrôle de séquences régulatrices.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western sur protéine membranaire

Je cherche a effectuer un western sur un extrait de protéine de levure (donc difficile a casser). cette protéine a la particularité d'etre accrochée et retenue a la membrane vacuolaire (ainsi qu'au RE).  [...] Merci, je n'ai pas encore essayé, mais si le laemli marche chez la levure, mais je pensais qu'il fallait au moins un detergeant pour solubiliser la proteine afin qu'elle ne reste pas dans le culot de debris.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

En résumé de l'article. on sait que c'est une protéine transmembranaire, on a sa séquence donc on sait aussi qu'il y a 7 cystéines. Comme souvent dans les enzymes les cystéines ont un rôle important, le but de l'article est de le vérifier dans cette enzyme en particulier.  [...] la protéine existe bien chez la levure sauvage si oui, pour vérifier que la construction de la protéine mutée ou sauvage s'exprime bien, il faut pouvoir la différencier de celle que la levure produit naturellement.  [...]