• Santé - Levure, Protéine, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Passer par le double hybride ?

Tu couples la GST à ta protéine d'intérêt et tu la fais s'exprimer. Ensuite tu utilises des billes sepharose-gluthation pour attraper la GST et donc ta protéine d'intérêt.  [...] Pour le double hybride c'est pas si simple. Il faut que ta protéine d'intérêt s'exprime bien dans les cellules (levure ou bactérie, il faut parfois tester plusieurs conditions de culture). Il faut ensuite voir dans quelle mesure elle n'autoactive pas le système.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transformation levure par PCR

Je travail sur les levure et je souhaite les transformer afin qu'elles expriment ma protéine d'intérêt couplée à une protéine fluorescente. Pour cela j'utilise la technique. PCR based transformation method qui consiste à utiliser un plasmide (pRS306) qui contient la protéine fluo et faire une PCR avec des oligonucléotides codants pour les séquences de mon gènes que je veux marquer.  [...] Je comprend la théorie mais techniquement je ne vois pas du tout comment cela se produit, comment mon plasmide intègre mes séquences codantes Est ce que il faut digérer mon plasmide avant si vous avez des publi ou des revues qui explique ca en détail je vous en serais très reconnaissant.   [...]

au secours je suis larguée!!

La méthode double hybride est la méthode qui utilise la levure comme système poour démontrer une interaction protéine protéine.  [...] Le crible double-hybride inverse consiste à rechercher des protéines mutantes ayant perdu la capacité d'interagir entre elles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western sur protéine membranaire

Je cherche a effectuer un western sur un extrait de protéine de levure (donc difficile a casser). cette protéine a la particularité d'etre accrochée et retenue a la membrane vacuolaire (ainsi qu'au RE).  [...] Je fais tous mes western sur une protéine membranaire (mais de cellules humaines et pas de levure) en Laemli (je n'ai jamais su l'écrire) ou d'autres tampons style Guanidium, urée, RIPA,... Ca ne marche pas le Laemli chez la levure Est ce que tu as essayé de casser au dounce.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Que voulez faire exactement Si c'est pour éliminer le tag, plusieurs options existent déjà telles qu'intercaller un site de coupure pour une enzyme spécifique entre le tag et la protéine d'intérêt.  [...] Je voudrais produire dans une bactérie ou une levure une protéine contenant un dégradation tag d'une part, et d'autre part une protéase (par exemple sous le contrôle du promoteur Xgal) qui permettrait de la dégrader, et ce avec le minimum d'interférences par rapports aux autres protéines de la bactérie/levure.  [...]

[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Pour l'IPTG je ne suis pas certain qu'il fonctionne chez la levure... je rappelle a toute fin utile que c'est un promoteur bacterien. y'a peu de chance qu'il fonctionne dans la levure, surtout qu'il necessite la presence de la protéine LacI pour etre réprime.  [...] je veux induire l'expression de ma proteine chez la levure pichia normalement cette proteine doit etre excreté hors de la levure.j'ai fait un preculture dans le BMGY et apres dans le BMMH( 0.5% methanol) à 30°c.  [...]

Une souris génétiquement modifiée à l'espérance de vie plus longue

En 1975, la rapamycine fut découverte sur l'île de Pâques, Rapa Nui en polynésien. Cet antibiotique inhibe la protéine mTOR qui intervientdans la croissance et la survie de la cellule. Wikimedia Commons, DP.  [...] La protéine mTor participe à de nombreuses fonctions essentielles et est connue pour intervenir sur la croissance et la durée de vie des cellules. En diminuant l'activité de cette enzyme, les scientifiques ont pu augmenter la longévité de différents organismes comme Saccharomyces cerevisiae (une levure unicellulaire), Caenorhabditis elegans (un ver) et Drosophila melanogaster (la mouche du vinaigre ).  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

la protéine GAL 4 est une protéine de levure. C'est un facteur de transcription. On a découvert, chez la levure toujours, une séquence d'ADN (minimale) qui placée devant une séquence codante (quelconque) suffit à déclencher sa transcription, en présence de la protéine gal4.  [...] 1/ Comment les séquenecs GAL4 et UAS sont inserées dans la drosophile Par manipulation génétique je pense. Pour la protéine GAL4, elle peut être inserée par KO, non.  [...]

[Biologie Cellulaire] Pharmacologie moléculaire

Bonjour, je ne comprends pas c'est quoi un système d'expression hétérogène que j'ai trouvé dans mon cours de pharmacologie moléculaire pouvez vous m'aider car j'ai cherché sur google mais sans réponse... merci d'avance.   [...] coli ), on parle d'expression homologue. Mais si tu produits une protéine humaine dans une levure, ou une protéine de levure dans une bactérie par exemple, tu utilises alors un système d'expression hétérologue.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

l'immunoblotting est juste une des techniques utilisées pour arriver à ces conclusions (par visualisation de l'intensité sur SDS PAGE ), donc à priori je ne vois pas le lien avec une protéine endogène.  [...] la protéine existe bien chez la levure sauvage si oui, pour vérifier que la construction de la protéine mutée ou sauvage s'exprime bien, il faut pouvoir la différencier de celle que la levure produit naturellement.  [...]