• Santé - Lavage, Interactions, Fonction, Protocoles, Saturation, Membrane

[Biochimie] tween20 et western-blot

Je voulais savoir à quoi sert exactement le tween20 dans le western Je sais que c'est un detergent donc je vois bien l'utilité pendant les phases de lavage pour minimiser les interactions non spécifiques mais en fonction des protocoles il y en a aussi en général dans la phase de saturation de la membrane (avec la BSA ou la caséine).  [...] Personnellement je n'en n'utilse que dans les hybridations et les lavages pour limiter les interactions hydrophobes.  [...]

cinétique... non enzymatique

Tu peux utiliser le modèle de Scatchard pour étudier les interactions ligands/récepteurs. Ca te permet de calculer le nombre de récepteurs en fonction de la quantité de ligand, la saturation des récepteurs, etc.  [...] J'ai pensé à faire du cross linking avec du glutaraldehyde, mais je n'aime pas trop l'etat figé de la manip, d'autant plus que A2 est en equilibre avec 2A, si je tire vers A2 avec par cross linking, je vais favoriser un sens au detriment de l'autre. De plus, le cross linking ne reflete pas vraiment l'interraction prot-prot puisqu'il se contente de fixer ensemble les groupements NH2 proches.   [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Dans chaque puits il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 90 µl de la fraction membranaire et 100 µl de la fraction cytoplasmique. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...] La membrane est reprise afin d'être utilisée pour détecter une autre isoenzyme. Elle est mise dans une solution de glycine à 0,1 M à 50°C en pratiquant une légère agitation. Plusieurs lavages successifs sont réalisés afin d'éliminer la totalité de la glycine, la suite du protocole est la même que précédemment, à partir de l'étape de saturation de la membrane.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je relance la discussion, car après avoir tenté maintes fois (en suivant le protocol de Haleckx), je n'arrive toujours pas à sortir ma protéine. Je suis désespérée, au secours. Je fais mes gels moi même. J'ai essayé du 8%, du 6% sans succès. Après coloration au rouge ponceau, la plus grosse protéine que j'ai est de 180 kDa.  [...] Ce que je ferais pour cerner un peu mieux le problème, c'est un dot-blot. tu déposes directement sur une membrane de WB 10 µl de ton échantillon, tu attends deux minutes que ça sèche puis tu traites la membrane comme si c'était un WB en reprenant le protocole à l'étape de saturation de la membrane.  [...]

[Biologie Cellulaire] Pourquoi perméabiliser une cellule

Pour faciliter l'entrée de la molécule Pour faciliter l'analyse Pour comparer l'action de la molécule avec et sans membrane cellulaire.  [...] Salut, je te réponds plutôt tard, mais pour les personnes qui se posent la même question que toi, je pense qu'ils font ce test (de perméabilisation de la membrane) au cas où il y aurait saturation d'un transporteur éventuel (tt dépend des caractéristiques de la molécule) mais apparemment ce n'est pas le cas puisqu'il y a un meilleur fonctionnement avec la membrane.  [...]

[Divers] Pression partielle en O2

En effet, cet appareil mesure l'absorbance vis-à-vis d'un rayon émis. Il permet ainsi de faire la différence entre l'oxyhémoglobine et la désoxyhémoglobine. A partir de là, on en déduit la saturation en oxygène. Cette saturation suit une loi représentée par une courbe sigmoïde fonction de la pression en O 2.  [...] Le calcul peut se faire aussi en fonction de la FiO 2 (Fraction inspirée) puisque SaO 2 =5 FiO 2 (environ. l'air contenant 21% d'O 2, la saturation naturelle dépasse les 97% normalement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] De plus, pourquoi faire la saturation des sites Ac anti-digoxygénine après l'hybridation et le lavage alors qu'en immmunodétection on sature (à la BSA par exemple) avant l'incubation avec l'Ac primaire.  [...]

[Biochimie] Western blot

Quelqu'un peut-il me donner exactement un protocole pour preparer un gel de 8%. Moi le SDS je le met au moment de la préparation de mon gel,d'autres personnes le met dans les tampon de séparation et de concentration.  [...] Tampon de saturation. attention, ne JAMAIS utiliser de lait pour saturer des membranes qui seront incubées avec des anticorps anti-phosphotyrosine. Le lait contient des phosphatases, alors tu vas perdre ton signal. Sinon, comme le dit Yoyo, il n'y a pas de protocole idéal.  [...]

Enfants prodiges, cellules gliales et compagnie....

Après avoir survolé l'histoire de Kim Ung Yong je me suis posé la question suivante. Alors que les autistes surdoués sont obligés de troquer contre leur capacités certaines fonctions ex. reconnaissance faciale, les surdoués/génies du type de Kim Ung Yong ne semblent pas concernés par ce système de contrepartie.  [...] car d'après les cours que j'ai eu la dessus, l'ouïe la vue l'odorat... sont assez proche géographiquement dans le cerveau, quand l'un ne fonctionne plus, cette zone cérébrale est utilisée pour un autre sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Petite molécule hydrophile

Tu as raison.. Parce qu'une molécule hydrophobe qui voudrait passer a travers la membrane plasmique devrait passer à travers les queues hydrophiles de la cellule. Cette interaction défavorable repousserais alors cette molécule sur le bord de la membrane plasmique.  [...] Parce qu'une molécule hydrophobe qui voudrait passer a travers la membrane plasmique devrait passer à travers les queues hydrophiles de la cellule. Cette interaction défavorable repousserais alors cette molécule sur le bord de la membrane plasmique. En attendant de passer par une protéine membranaire.  [...]