• Santé - Lactose, ADN, Intérêt, Synthèse, Beta, Colonies

[Biotechnologie] vecteurs pGEMT -TOPO- Pbluescript - lambdaZAGII

j'ai compris que les vecteurs types pbluescript, pGEMt et Topo possèdent. les caractéristiques des plasmides (origines de réplications plasmidiques, 1 ou plusieurs gènes de sélection c'est à dire de résistances à un antibiotique, un gène marqueur l'opéron lactose qui lorsque l'ADN d'intérêt sera inséré ne permettra plus la synthèse de la beta galactosidase et donc la formation de colonies bleues sous l'action du Xgal et de l'IPTG) des caractéristiques phagiques comme une origine de réplication phagique F+ ou F- avec réplication dans le sens de l'opéron lactose ou dans le sens opposé ( lié au sens d'insertion de l'ADN d'intérêt ou bien aux caractéristiques du phage M13 de ne synthétisé qu'un brin d'ADN dans le cas ou l'infection est réalisée avec un phage helper ).  [...] Ensuite dans le cas du phagemide lambda zagII j'ai compris qu'en gros le vecteur est composé du bras gauche et droit du phage lambda et que la partie centrale a été remplacé par le pbluescript avec l'ADN d'intérêt et qu'apparemment la co-infection avec un phage helper permet ensuite son excision.  [...]

Criblage

Dans la synthèse de l'insuline in vitro par exemple, on effectue un criblage des colonies blanches obtenues après ensemencement sur un milieu contenant le lactose. On rechercher les bactéries ayant un plasmide contenant le gène recherché mais le fait que ces colonies soient blanches, cela veut dire pas d'expression du gène de la beta-galactosidase et donc insertion du gène d'intérêt non.  [...] Si une colonie pousse, c'est qu'elle a bien reçu un plasmide. cet événement est séléctionné par un gène de résistance à un antibiotique présent dans le milieu.  [...]

phage M13 et transformation bactérienne

Enfin il me semble qu'on utilise des bactéries spéciales possédant un épisome F' contenant une résistance à la tétracycline pour son maintient. Est ce que ces bactéries possèdent aussi un opéron lactose ne synthétisant qu'une partie de la beta galactosidase de manière à ce qu'il y ai un gène marqueur.  [...] dans ce cas est ce que le phage M13 possède lui aussi un opéron lactose par exemple codant uniquement pour le peptide alpha qui serait complémentaire de la partie de la beta galactosidase synthétisée par la bactérie et dans le cas où notre ADN d'intérêt aurait été inséré on aurai plus de synthèse de la beta galactosidase.  [...]

mutants constitutifs d'E.Coli

il me faut une explication pour cette question. l'apparition de mutants constitutifs d'E.Coli pour la synthèse de (beta)B-galactosidase peut résulter de mutations sur quelles parties de l'opéron lactose.  [...] salut,je veux d'abord citer que cé ma première participation au forum et j'ai choisis qu'elle soit la réponse à ta question.les mutations constitutives influencent sur l'opérateur de l'opéron lactose,et s'est mis en évidence en remplaçant le lactose par son analogue de substrat l'isopropyl thiogalactoside ce qui a entrainé l'arret de la synthèse du beta galactosidase.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

IPTG induces activity of beta-galactosidase, an enzyme that promotes lactose utilization, by binding and inhibiting the lac repressor. In cloning experiments, the lacZ gene is replaced with the gene of interest and IPTG is then used to induce gene expression.  [...] * si j'ai un gène lacZ fonctionnel, il produira la bêta-galactosidase. si j'ajoute X-gal dans le milieu, les bactéries possédant ce gène lacZ fonctionnel produiront la béta-galactosidase et lemétabolisme de l'X-gal se fera. les colonies seront donc colorées en bleu (sur milieu supplémentée en X-gal, j'insiste).  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

Dans un premier temps E.coli va croître dans un milieu sans lactose et en présence d'ampicilline. Cela permet d'éliminer les bactéries n'ayant pas intégré le plasmide recombinant (et donc le gène de résistance) et d'obtenir les bactéries d'intérêt, sans transcrire la beta-galactosidase et la chaine d'insuline.  [...] L'intérêt d'avoir une protéine hybride beta-galactosidase et chaine de l'insuline est d'éviter la dégradation de l'insuline, en effet la bactérie ne connait pas ce gène car elle n'en a pas besoin donc fera tout pour le dégrader. Alors que la beta galactosidase elle le connait bien donc ta chaine d'insuline sera protégée de la dégradation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Répression de l'Opéron Lactose

le lactose se fixe sur le tétramère, va modifier la conformation dans l'espace du tétramère, ˜ d'affinité du tétramère pour l'opérateur. Le répresseur ne se fixe plus sur l'opérateur mais bine l'ARN polymérase. Et on aura alors synthèse des protéines qui interviennent dans le métabolisme du lactose.  [...] En absence de lactose, la cellule métabolise le glucose, ou autre sucre préféré au lactose. L'opéron en donc réprimé à 99%. il faut tout de même une faible transcription basale pour permettre la synthèse de bêta-galactosidase et de lactose perméase, qui permettent la détection de l'allolactose, qui lui va enlever la répression du gène lorsque le lactose devient la source d'énergie pour la cellule.  [...]

operon

En absence de lactose la protéine répresseur lac se lie spécifiquement au site de contrôle (operateur) dans l'opéron lac, ceci empêche l'ARN poly d'initier la transcription des gènes de l'opéron lac ce qui arrête la synthèse des protéines.  [...] La synthèse de la beta gal peut être induite par l'IPTG (isopropylthiogalactoside), en effet l'IPTG est un inducteur de l'opéron lactose. L'IPTG permet la complémentation alpha intra allélique d'une forme déficiente de la beta galactosidase, il induit donc la production de beta gal.  [...]

[Biotechnologie] le système pET - surexpression de protéines

et cet opéron, c'est quelque chose qu'on introduit dans la bactérie pour avoir un bon contrôle ou c'est le vrai opéron lactose dans lequel on introduit alors le gène codant pour la T7 RNA pol (notre gène d'intérêt) de telle manière à ce que notre protéine soit transcrite en même temps que la bêta-galactosidase, etc.  [...] La question 1 est juste car lorsqu'on ajoute un dérivé du lactose, l'IPTG, qui a l'avantage de ne pas être métabolisable, on induit l'expression de la T7 RNA polymérase et du gène d'intérêt. Ceci est un mécanisme de régulation classique par l'opéron lactose qui est situé dans le promoteur de la T7 RNA polymérase (lacUV5) et dans le promoteur du gène d'intérêt.  [...]

[Evolution] Evolution humaine, nouvelle génération, homo sapiens évolué ? - Page 7

En fait je n intéresse pas à la cause (reproduction et autres) je voudrais directement connaitre les différentes hypothèses de conséquences pour cela il faut connaitre les causes of course.  [...] On peut aussi s'interroger sur le rôle de la méthylation de l'ADN. Au cours d'une vie cellulaire des informations externes peuvent activer ou réprimer des gènes(ex présence ou non de lactose, ou de lactose et de glucose dans le milieu de culture d'une levure entraînant la répression ou l'activation de l'opéron lactose).  [...]