• Santé - Intégration, Transgene, Génome, Cellules

[Biologie Cellulaire] Stabilité d'une transfection

Suite à une transfection réalisé grâce à de la lipofectamine j'ai une expression transitoire de mon gène d'intérêt, cependant pendant la phase de sélection avec le G418 de façons général toutes les cellules meurent et je ne peut pas récupéré de clone stables.  [...] parce que si tu fais une intégration dirigée tu peux linéariser ton plasmide et déphosphoryler. Je n'ai jamais utilisé cette technique avec la lipofectamine, les cellules sur lesquelles je travaille doivent être électroporées.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

L'intégration d'un transgène dans le génome se fait par recombinaison homologue. Cela nécessite la présence, de part et d'autre de la région du plasmide à intégrer, de séquences présentant une homologie forte avec la zone du génome dans laquelle on souhaite l'intégrer.  [...] Tes problèmes proviennent certainement, pour les cellules CHO, de la présence d'une séquence homologue entre le gène de résistance et le transgène, excluant ainsi le transgène de l'intégration dans le génome de hamster. Pour les cellules 293, pas de séquences suffisamment homologues à une région du génome humain pour permettre l'intégration de ton matériel génétique.  [...]

[Génétique] différence transgenèse et transformation plasmidique

Je ne vois pas la différence entre une transgenèse (le fait d'intégrer un gène dans un nouvel organisme en gros si je ne me trompe pas) et la transformation plasmidique (où on extrait un plasmide, on le transforme = on y insert un gène, qu'on transmet à une bactérie).  [...] Le transgène s'intègre dans le génome de l'hôte, il fait donc partie intégrante du patrimoine génétique de l'hôte. A l'inverse, après transformation d'une bactérie, il n'y a pas d'intégration du plasmide dans le génome de la bactérie. Donc si le plasmide n'a aucune utilité pour la bactérie, il ne perdurera pas et sera perdu, à la différence d'un transgène chez un eucaryote qui lui perdure forcément puisqu'il fait partie du génome.  [...]

[Génétique] Production de souris transgéniques

Quand on fait de la recombinaison homologue, on transfecte des cellules ES avec l'ADN d'intéret. Par homologie, l'ADN s'intègre à l'endroit qu'on veut dans le génome. grâce à une sélection seules les cellules qui ont reçu le transgène au bon endroit survivent.  [...] Comme je l'ai dit, on utilise la recombinaison homologue pour de petits fragments d'ADN dans le cas de transfection de cellules ES, afin de cibler une intégration précise dans le génome.  [...]

[Biochimie] Plein de questions de bioch

1. On injecte le transgène dans une cellule de morula (8-16 cellules). On prie assez fort pour que le transgène s'insèrt dans le génome (je simplifie, la prière ne fait pas tout ).  [...] Tg x + ==. Tg/0 Vous obtenez une souris portant une copie du transgène dans toutes ces cellules. C'est ce que l'on appelle communément la souris transgénique (même si la chimère est déjà une souris transgénique, mais son statut d'intermédiaire fait qu'on la différencie généralement de la souris transgénique que l'on cherche à produire).  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

C'est cette propriété qui a été utilisée par les scientifiques pour muter spécifiquement un gène de la manière dont ils le désiraient. On savait que l'on pouvait injecter de façon transitoire un fragment d'ADN dans une cellule. L'idée était d'utiliser comme fragment une version mutée du gène que l'on ciblait, on savait que statistiquement se produirait dans l'une ou l'autre des cellules un événement de double recombinaison qui introduirait la mutation dans le génome de la cellule.  [...] La cassette TK permet de tester si la recombinaison a eu lieu. On sait déjà que les cellules ont intégré le transgène. La cassette TK n'étant homologue à aucun gène de la cellule, elle n'est jamais intégrée au génome. Une fois que la recombinaison a eu lieu, en principe, le transgène est dégradé.  [...]

[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Après une petite recherche sur google, voici un site qui me parait intéressant. http.//ifr3.igf.cnrs.fr/plateforme/u...ir_IFR3_v2.pdf Lorsqu'on infecte une cellule avec un virus modifié, selon le type de modification qu'on a fait, il se peut que des séquences importantes manquent, nécessaires pour l'intégration du transgène par exemple.  [...] Certains virus permettent juste d'introduire le transgène dans la cellule sans pour autant l'intégrer au génome. Ce qui implique une dilution du transgène au cours des divisions cellulaires.  [...]

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

- lors de l'introduction du transgène dans le génome de ma cellule souche grace a un plasmide comment faire pour savoir sur quel chromosome s'est insérer le gène.  [...] Pour résumer, la transgénèse se fait sur cellules ES par Rec. Hom., on sreen plusieurs centaines de clones (vérifie l'intégration par PCR) et on injecte l'embryon au stade de morulla, ensuite il faut prier pour que la lignée germinale soit touchée, sélectionner une descendance positive et refaire une croisement si nécessaire (s'il est hétérozygote).  [...]

vecteurs intégratifs

Pour faire de la recombinaison homologue, pour intégrer un transgène par exemple, il faut privilégier la linéarisation de ton plasmide portant un gène d'intérêt. Le plasmide étant d'une forme plutôt circulaire (ce n'est pas exactement vrai en réalité, mais c'est pour simplifier), en le traitant avec des enzymes de restriction adéquates, tu vas le le rendre linéaire.  [...] Merci je comprends mieux. petite précision, quand on parle de recombinaison homologue on parle d'un éventuel crossing over après intégration du transgène ou simplement intégration du transgène merci d'avance.  [...]

Définition | Transgénèse | Futura Santé

Technique servant à introduire un gène étranger ( transgène ) dans le génome d'un organisme, en vue d'obtenir un organisme génétiquement modifié. Pour être réussie la transgénèse nécessite.  [...] - et enfin la possibilité d'obtenir la régénération d'individus entiers à partir de cellules génétiquement modifiée.  [...]