• Santé - Hybridation, Sonde, Fragments, ADN

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

j'ai réalisé une hybridation moléculaire avec des sonde 16S et des sonde spécifiques d'un gène avec les fragments d'ADN d'une souche bactérienne.Le profil d'hybridation avec la sonde spécifique du gène m'a donné une seule bande de taille 2 megabases. Mon prof ma dit qu'elle correspond à un mini-chromosome.  [...] .En fait y'a pas eu de conjugaison,j'ai réalisé une digestion d'ADN avec cette enzyme et une migration PFGE,ensuite j'ai hybridé mes fragments avec les sondes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Le southern est effectué pour analyser une partie du génome et ses modifications éventuelles. Il est fait avec de l'ADN génomique que l'on a fait digérer par EcoR1, et on a hybridation avec une sonde radioactive synthétisée par l'ADNc et on compare les distances de migration avec des fragments de tailles connues qui servent de marqueurs de taille.  [...] - l'EP me gène. Même s'il n'a pas de site EcoRI il peut perturber le site d'hybridation de ta sonde non Dans ce cas là tu auras un résultat négatif, qui se confond avec le résultat de la délétion du gène.  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

2) les bandes ne sont pas le chromosome X mais un fragment du gène considéré. Les 2 allèles ont des séquences différentes, donc les enzymes de restriction coupent en des endroits différents, donc les fragments obtenus n'ont pas la même taille.  [...] l'analyse du document 2 permet de voir que les enzymes de restriction coupent l'ADN en reconnaissant une séquence particulière de désoxunucléotides, les fragments n'ont donc pas la même taille. Les fragments obtenus sont plus petit 1,3kb. L'allèle muté est mis en évidence.  [...]

Hybridation in situ

La sonde peut s'hybrider de façon aspécifique sur l'ADN. Si l'on ne fait rien alors cette hybridation donne du bruit de fond.Le but du de l'ADN de saumon (on utilise celui ci parce que le saumon pond beaucoup d'oeuf, du coup on peut en avoir beaucoup rapidement) est de capter les hybridations aspécifiques.  [...] Donc si je comprend bien le principe, l'ADN de saumon se fixe sur l'ADN et l'ARN du tissu sur lequel je veux faire l'hybridation in situ, et quand je dépose la ribosonde spécique il y a une compétition entre l'ADN de saumon fixé et la sonde, diminuant ainsi le marquage aspécifique tandisque ma sonde se fixe sur l'ARN que l'on veut mettre en évidence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] Je pense qu'il pourrait s'agir de la transcription inverse cependant un détail m'intrigue. l'hybridation de la sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse. La transcription inverse s'effectue dans un tube sans que les ARN aient été séparés auparavant.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Attention les phages sont une forme de virus bactérien (à vérifier). Il y a ici deux facon de faire. Soit on construit des plasmides directement que l'on peut insérer dans des bactéries via des méthodes comme l'éléctroporation. Sinon les phages. un phage est une sorte de virus bactérien, constitué donc d'une capside et d'un acide nucléique à l'intérieur.   [...] Tu vas pouvoir ensuite sequencer ton ADN plasmique, ou sous cloner si le fragment integré est trop gros pour un sequencage (manip 3).  [...]

[Biologie Moléculaire] absence d'hybridation southern : interpretation?

Sinon a moins d'un probleme purement technique je ne vois pas pourquoi ta sonde s'hybride pas. Mais peut etre qu'en précisant un peu le but exact du tp on aurait plus de piste.  [...] - typiquement l'absence de signal pourrait indiquer qu'il y a eut un rearrangement chromosomique et que la partie correspondante a ta sonde a disparu. Ou plus simplement une délétion de la région concernée.  [...]

[Microbiologie] hybridation moléculaire

je veux savoir également comment je pourrais discuté les résultats de cette hybridation moléculaire (ADN-ADN)afin de montrer la localisation chromosomique de gene de resistance bla lut.(la figure ci-joint).la premiere photo c'est un profil électrophorèse en champ pulsé (PFGE) de l'ADN de la souche Pseudomonas luteola digeré avec l'enzyme I-CeuI.  [...] la photo B,c'est l'hybridation des fragments avec une sonde spécifique d'un gène de résistance,et la photo C c'est l'hybridation avec une sonde 16s.les rèsultats de cette analyse a montrè que la sonde bla lut,specifique de gene a été hybridé avec un fragment de taille entre 700kb-800kb et il a hybridé aussi avec la sonde 16s,et pourcela les resultats suggere que le gene est chromosomique.  [...]

[Divers] Epissage

L'hybridation de l'ARNm avec l'ADN génomique correspondant suivi de l'action d'exonucléase permet d'obtenir les fragments d'ADN génomique correspondant aux exons. Si l'ADN génomique reste entier après digestion, c'est que l'ARNm n'est pas épissé.  [...] Le northern c'est pas mal non plus.En plus on visualise bien les deux bandes sur le gel correspondant aux formes non épissées et matures. A condition d'avoir pris une sonde exonique.  [...]

[Microbiologie] Hybridation

Coucou tous le monde, au fait je vais faire de l'hybridation avec une sonde 16s et une sonde d'un gene de résistance,pour voir si le gene est chromosomique ou non, (puisque le 16s est du chromosome),pour la digestion donc j'ai utilisé l'enzyme. Iceu-1 (qui coupe l'adn) mais lors de la migration.  [...] Le site de reconnaissance est super long (je trouve que 27-28 nucléotides de détection, non dégénéré, c'est long - à comparer avec les 6-10 normalement), ce qui signifie une fréquence de coupe de l'ADN faible (donc de plus gros fragments).  [...]