• Santé - Génome, ADN, Amorces

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

La RAPD est une technique de PCR permettant d'obtenir une empreinte spécifique à partir d'un génome donné. On utilise pour cela des amorces ayant une faible spécificité (elle s'accrochent à de multiples endroits de l'ADN). Comme tous les génomes sont différents, les sites de fixation des amorces seront variables d'un individu à l'autre.  [...] Je connais moins bien l'AFLP, mais il me semble que c'est la technique utilisée pour les empreintes ADN humaines (par exemple en criminologie). Elle se base sur la restriction du génome, c'est à dire coupure par des enzymes de restriction. On utilise des enzymes ayant un site de restriction assez rare.  [...]

[Biochimie] Rt-pcr

j'ai plusieurs question concernant la RT-PCR. Est ce que la RT et la PCR ce font dans le même tube. Sur un genome procaryote constutuer d'ORF, faut il utiliser deux amorces spécifique de la region que l'ont souahite amplifier Ces amorces sont elles les meme pour la RT que pour la PCR La PCR peut elle se faire avec juste le cDNA synthétiser ou bien il faut faire les 2 brins d'ADN.  [...] Merci de vos reponse car la je galére un peu sur ma publication.   [...]

Vaccins antigrippaux : la génétique inverse et les cultures cellulaires | Dossier

En virologie moléculaire, la génétique inverse définit la génération de virus dont le génome est produit à partir d' ADNc ( ADN complémentaire). L' ARN viral est isolé et transcrit en ADNc par une transcriptase inverse. L'ADNc est amplifié par amorces spécifiques des segments viraux puis cloné (Marsh and Tannock 2005 42 ).  [...] un plasmide pour la transcription des huit ARN viraux. chacune des huit unités de transcription comprend le promoteur d'origine humaine de pol I, l'ADNc de polarité négative codant un segment du génome viral, et la séquence terminator de pol I d'origine murine.  [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

C'est une méthode de PCR récentes, qui utilise des amorces spécifiques, elles permettent d'amplifier plusieurs ADN cibles en même temps. L'ADN de chaque amplification est quantifié à tous les cycles par fluorescence spécifique pour chaque ADN cible. Il faut une connaissance du génome des différents parasites.  [...] La méthode multiplex- en temps réel est la méthode la plus rapide aujourd'hui. On connaît le génome des parasites donc on peut utilise des amorces spécifiques. Elle permet d'avoir les résultats plus rapidement interprétables. L'inconvénient est que la sensibilité et la spécificité sont plus faibles que pour les autres techniques.  [...]

[Génétique] Sondes de Southern Blot et complémentation

J'ai quelques questions concernant la technique du Southern Blot et notamment un problème lié aux amorces. Il s'agit d'un problème de compréhension du fonctionnement.  [...] Les amorces utilisées pour le Southern sont créées à partir d'ADNc par complémentation avec des dNTP marqués par radioactivité pour être visibles en autoradiographie. Si j'effectue le Southern sur un génome complet après digestion enzymatique (et dénaturation) comme le demande la procédure j'effectue le Southern sûr de l'ADN qui n'est donc pas épissé.  [...]

Comment choisir des amorces pour amplifier l’ADN génomique?

J'essaye de designer des amorces pour amplifier l'ADN génomique sur NCBI. Tout se passe bien jusqu'à ce que j'ai mes primers. Mais quand je les mets dans Blast, cette séquence ne correspond plus du tout au gène que je cherche à étudier. Est-ce normal, parce que c'est une amorce.  [...] provenant du génome Ou bien est-ce que je fais une erreur dans le design Quelqu'un peut-il me dire comment designer ce genre d'amorce.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

Si on veut savoir si cet individu est porteur d'un virus du sang, on va utiliser des amorces spécifiques d'une séquence du virus en question, et la PCR amplifiera cette séquence et cette séquence seulement, au détriment de tout le reste de l'ADN, qui était beaucoup plus abondant au départ (puisque le génome humain est beaucoup plus long que celui du virus).  [...] Je comprend maintenant que la PCR est avant tout un outil pour amplifier l'ADN. Cependant, il semble évident qu'il soit nécessaire de connaître la séquence de la mutation recherchée pour utiliser des amorces adaptées.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

Les amorces, bah ils vont se fixer à une séquence que tu souhaite et vont permettre de servir de point de départ pour qu'une ADN/ARN polymérase face son boulot.  [...] Ensuite il y a la taille de l'amplicon, c'est à dire en gros l'écart entre nos deux amorces sur le brin d'ADN. Là c'est statistique, une amorce c'est 20 bases en gros qui doivent être d'une séquence donnée. Sur un génome, vous avez le risque que vos amorces aillent se fixer ailleurs, c'est rare mais bon.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

La solution universelle est de faire une gamme d'ADN génomique. le génome haploïde comporte un exemplaire de chaque gène, i.e. 1 copie. Si tu connais la masse d'un génome haploïde (j'ai trouvé une publi avec la masse d'un centaine de génome végétaux par cytométrie en flux), tu peux calculer le nombre de génomes haploïdes contenus dans une quantité donnée d'ADN génomique, c'est à dire le nombre d'exemplaire de chaque gène. 1 équivalent-génome = 1 copie du gène.  [...] En construisant ta gamme-étalon avec de l'ADN génomique, tu as la même référence pour étudier tous tes gènes. Tu peux même concevoir un couple d'amorces qui amplifie une partie d'ADN non codant pour vérifier que tes prep' d'ARN ne contiennent pas trop d'ADN génomique.  [...]

Housekeeping gene (gene de ménage)

Pourquoi un gène de ménage Prenez n'importe quel couple d'amorces génomiques, il fait quantifier l'ADN et pas les transcrits.  [...] Pour éviter cela, et vu que vous vous intéressez à la quantité de cellules, je propose de mesurer une quantité d'ADN génomique, qui ne varie pas et est toujours proportionnelle à la quantité de cellules (sauf exception). En mesurant n'importe quelle cible dans l'ADN génomique, on peut remonter a la quantité de génomes, et donc de cellules.  [...]