• Santé - Fragments, Enzyme, Restriction

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Je tiens à vous dire que pour digérer mes fragments j'utilise l'enzyme de restriction Sfi I et ce à 50°C pendant 2h.  [...] Pour l'étape de ligation, quelle quantité de vecteur utilises-tu Quels rapports vecteur.insert Quelle quantité de ligase (Unité et volume) Quel volume final représente le milieu réactionnel de ligation Combien de temps incubes-tu A quelle température Quel volume de produit de ligation utilises-tu pour transformer tes bactéries.   [...]

[Microbiologie] banque de gènes

mon encadreur m'a demandé de faire une banque de gène, est il possible d'obtenir plusieurs fragments de gène en faisant la digestion par une seule enzyme de restriction et comment.  [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

Ouii MEerci je sais ce sont des enzymes de restriction c'est plus compliqué que ça c'est un article que je dois présenter mais il y a vraiment quelques parties que je comprends pas.  [...] 5. Excise the restriction enzyme-insensitive fragments of the same size as the undigested DNA fragment, and purify them with a DNA gel Extraction kit as described by AXYGEN.  [...]

Carte de restriction de Pcr-GAI

Bon apparemment on dispose de BamHI donc dans ce cas on peut libérer le 5' GAI en utilisant HindIII et BamHI et ensuite le faire digérer séparément par XhoI et BglII si on obtient deux fragments par digestion, on a les deux sites de restriction sur le 5' GAI (donc dépend d'un coup de chance) sinon il faut (pour améliorer la carte de restriction) obligatoirement isoler le 3'GAI avec EcoRI et HindIII et le mettre en contact avec l'enzyme dont on cherche encore le site de restriction.  [...] J'ai peut être oublié de préciser que je n'ai jamais établi de carte de restriction ^^'. En fait je ne vois pas du tout comment placer les sites de restriction rien qu'en regardant une électrophorèse...Car finalement on aura des fragments de différentes tailles à mettre bout à bout mais dans quel sens.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

- TRANSCRIPTION. ( se fait dans le noyau pour synthétiser l'ARN messager ( 1 seul brin ) qui va sortir du noyau au cytoplasme, cette transcription commence par une ouverture d'ADN par une enzyme, ARN polymerase qui va synthétiser l'ARNmessager en fait intervenir les nucléotides en complémentarité.  [...] Qu'est-ce-que ces fragments de restriction Les sites de restriction Et les enzymes de restriction.  [...]

Banque d'ADN

Les banques d'ADNg ne permettent pas d'isoler de gènes en particulier, mais plutôt des fragments d'ADN, qu'on doit par la suite cribler.  [...] Et n'oublions pas qu'une bonne banque se doit d'être un minimum redondante, et que la taille des fragments n'est pas choisie au hasard en fonction de ce qu'on veut en faire.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

si tu coupes ton ADNg de levure par une enzyme de restriction tu vas avoir des milliers (voir des centaines de milliers) de fragments. Tu vas les cloner tous un part un pour trouver le bon...ben non.  [...] Mes professeurs appelaient ça digestion ménagée. Je crois qu'on utilise un chélateur d'ions divalents pour limiter l'action des enzymes de restriction ( EDTA dans le cas des endonucléases, qui va chélater le Mg2+ dont ces enzymes ont besoin pour fonctionner).  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

Ces sites sont connus à l'avance (= on sait donc où ils se trouvent et quelle enzyme les reconnaîtra spécifiquement). Comme tu te doutes, HindIII et EcoRI ne reconnaissent pas les mêmes sites. Donc, en fonction des enzymes que tu utiliseras, tu découperas ton plasmide en morceaux de tailles différentes.  [...] Sinon, la digestion c'est quand tu mets ton enzyme dans le mélange réactionnel et que tu attends un pitit moment pour qu'elle agisse (faut-il qu'elle parcoure la chaîne de caractères et trouver la regexp qui match quoi). Il faut donc que d'une façon ou d'une autre, on teste le succès de la chose.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Aussi, j'ai fait une carte de restriction, est ce qu'il serait possible de la scanner et que qqn me dise si celle ci est correcte.  [...] Aussi, j'allais vous demander est ce que si je scannais ma carte de restriction, vous pourriez me dire si celle ci est correcte De même pour le reste de mon énoncé, j'ai répondu à tout mais c'est pour avoir une confirmation belle et bien sure.  [...]

Technique : RFLP

L'objectif de la RFLP (Restriction FRagment Lenght Polymorphism pour Polymorphisme de longueur des fragments de restriction) est de mettre en évidence des variances alléliques.  [...] Si le fragment possède un site de restriction X, il est clivé en ce point (par l'enz. de restriction correspondante) et il y aura migration de fragments plus courts que si ce site de restriction est absent (mutation).  [...]