• Santé - Extrait, Nucléaire, Absence, Protéine

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

Si la protéine est nucléaire, tu devrais essayer de faire des extraits de protéines nucléaires pour enrichir ton extrait.  [...] Sinon, vous êtes en culture cellulaire. Qu'est ce qui vous empêche de faire une grosse quantité de boite, d'extraire vos protéines pour les concentrer.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Ta protéine est une protéine nucléaire Est tu certaine de bien libérer toutes les protéines dans ton extrait protéique En particulier vas tu assez loin dans la concentration en KCl Si cela se trouve ta protéine reste fixée sur l'ADN.  [...] Le lysat c'est ton extrait expérimental ou ton contrôle. Parce que si c'est ton extrait expérimental elle n'est peut être simplement pas assez concentrée dans ton extrait. Du coup dans ce cas là, le plus simple dans un premier temps serait de faire un extrait nucléaire et un passage en centricon/microcon (rien de vulgaire) pour concentrer ton matériel et en mettre 3 caisses.  [...]

[Biochimie] Extraction proteine nucleaire nematode

Sinon tu peux taggé ta proteine mais ca va te prendre du temps, si tu as la séquence tu fais un histidine tag ou une fusion avec la gst et tu isole sur colonne d'affinité. Mais pour ca va falloir faire des constructions, les microinjecter, et avoir des vers transgéniques.  [...] Bon je ne suis qu'étudiant pour le moment, donc je te déblatère ce que j'ai vu en cours. J'ai un peu bossé sur le nématode en stage mais j'ai pas purifié de proteine.  [...]

Protéines du noyau

Dans les livres, si jamais tu trouves des informations sur les phi (et je ne sais pas ou car ce n'est pas ma specialite...) les proteines vont probablement etre classees par familles, ou fonction mais probablement pas par localisation...en tous cas pas pour des proteines nucleaires.  [...] Ben si tu veux isoler spécifiquement les protéines nucléaires je pense qu'il te faut les isoler dés l'extraction protéique en faisant un extrait cytoplasmique et un extrait nucléaire.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...] un conseil pour les grosses protéines comme la tienne, il est recommandé de faire un transfert sur la nuit (ca transfert tres mal).  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence

oui mais si ma protéine est nucléaire mes anticorps fluorescent ne vont pas passer dans le noyau donc comment dois-je faire pour mettre en évidence cette protéine dans le noyau.  [...] donc si j'ai bien compris pour mettre en évidence la présence d'une protéine nucléaire, on utilise des anticorps contre cette protéine et des intercalants de base et donc si on a un mélange des 2 cela vaut dire que la proétaine est présente dans le noyau.  [...]

Problème de traduction d'une recherche scientifique...

La recherche porte sur l'expression du gène Nia1 chez Arabidopsis et la phrase est celle ci. Nuclear run-on assays demonstrated that Nia1 gene transcription increased dramatically after cytokinin treatment.  [...] Tu prends un fragment d'adn correspondant à un gene cloné, des ribonucléotides tri-phosphates (atp, gtp, utp, ctp) donc un marqué radioactivement, et les protéines de la machinerie de transcription (ARNpolymérase II pour arnm) (extrait nucléaire ou protéines purifiées).  [...]

[Biologie Cellulaire] Infos protocole

- les conditions d'IP dépendent de la protéine à immunoprécipiter. sa localisation (membranaire, cytosolique, nucléaire) conditionne le type d'extraction protéique à effectuer, de son abondance va dépendre la quantité de lysat à utiliser.  [...] la proteine est la nitric oxide synthase phosphorylée elle doit etre memnbranaire et peut etre cytosolique je l' extrai d'une tranche de cerveau de 250micrometre elle est donc en tres petite quantitée.  [...]

Problème de biologie moléculaire

Donc pour tester le fait que c'est un facteur de transcription, j'utiliserai un electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Vu que je connais mon gène, je le réplique en masse et le met en contact avec un extrait nucléaire. Des protéines vont s'y lier et ralentir la migration, confirmant mon hypothèse du facteur de transcription.  [...] pour un EMSA, il faut une sonde ADN, donc savoir un minimum sur quoi peut s'accrocher votre protéine. Il faut mieux définir votre expérience. Protéine produite + ADN +/- extraits protéiques Vous avez un anticorps contre votre protéine pour faire un super shift et si l'interaction n'est pas directe Dans ce type d'expé, une interaction ne suffit pas pour dire que c'est un FT, de la même façon que l'absence d'interaction ne suffit pas pour dire que ce n'en est pas un.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème avec gel d'acrylamide avec urée

L'expérience que je fais est la fixation d'ARN sur des billes de streptavidin-agarose. J'incube les billes avec des extraits nucléaires, je lave et j'élue les protéines avec un mélange d'acide acétique glacial 66% et 33mM MgCl2. Je précipite ensuite les protéines dans l'acétone (5 volumes) en présence de glycogène.  [...] Comme vous le voyez, il y a un énorme problème de migration pour les pistes 2 et 3, alors qu'il n'y a aucun problème pour l'extrait nucléaire repris dans du laemmli... J'en déduit que le problème ne vient pas de la migration ni du gel.  [...]