• Santé - Extraction, Plasmide, Kit

[Biologie Moléculaire] Transfert de résistance

Si je prends une population de souches résistante, j'en ai à peut près la moitié qui présentent un plasmide a l'électrophorèse (après extraction avec un kit traditionnel). Et je veux savoir si la souche est capable de transférer son plasmide à une souche sensible et la rendre résistante.  [...] Je fais mon liquid mating, l'obtient des transconjugants résistants mais je ne retrouve pas forcément le plasmide... Premier problème. A ma connaissance, une bactérie ne peut transférer sa résistance que par le biais d'un plasmide, non Alors comment mes souches deviennent résistantes Estce qu'elle peuvent intégrer le plasmide aussi rapidement.  [...]

Transfection plasmide gateway et faible expression proteique

J'essaye en ce moment de transfecter un plasmide pDEST40 (construit avec technologie gateway) et j'obtiens une expression proteique vraiment très faible.  [...] Je veux transfecter des Hek293T, j'ai essayer différents kit d'extraction du plasmide, vérifié la sequence du vecteur et de ma protéine, verifié la concentration d'ADN, testé plusieurs concentrations... je ne sais pas quoi faire d'autre.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Pour concentrer ton ADN, tu peux éventuellement utiliser un désicateur pour évaporer un peu d'eau de ton produit de purification d'ADN plasmidique.  [...]

extraction de gel

je dois faire une extraction d un plasmide qui a migre sur gel d agarose donc je dois faire une extraction sur gel est ce que auelau un peut il m expliquer le concept je dois utiliser le kit de biolabs de monarch.  [...] Le concept est tres simple dans ton tube ou tu récolte ton plasmide il peut y avoir plusieurs longueur d'ADN (ton plasmide avec insert, mais pourquoi pas ton plasmide vide, ou autre...) ducoup tu dois séléctionner uniquement ce qui t'interesse, tu les sépare donc par electrophorèse sur gel, et ensuite puisque tu visualise ou se trouve ton ADN sur ton gel, il suffit d'extraire (physiquement, avec une lame de rasoir par exemple)le petit carré ou se trouve la bande d'ADN qui t'interesse, ensuite le gel va etre fondu et purifié afin de retirer l'agarose et ne récupérer que l'ADN.  [...]

Extraction du plasmide

la solution de neutralisation neutralise l'effet de la solution de lyse une fois que tes bactéries sont lysées car a long terme ça peut être néfaste pour ton plasmide, et il me semble (mais je ne suis plus sur) que dans ce kit la neutralisation entraîne aussi la coagulation des débris bactériens qui apparaissent sous forme de nuage blanc dans ton tube afin de pouvoir mieux les éliminer par centrifugation.  [...] les RNase je pense que tu l'aura deviné par toi même, servent a empêcher l'action des RNase présente dans ta solution (qui seraient issus des bactéries ou de contamination par exemple) et qui risqueraient de dégrader ton plasmide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Je viens vous trouver car j'ai un petit doute quand à une extraction d'adn plasmidique. Habituellement j'utilise des kit qiagen (miniprep) et j'obtiens environ 100ng/µl de plasmide.  [...] Sinon nous en routine on fait des exctractions phenol/chlo pour des minipreps (4ml de culture) puis sequencage. Si c'est bon on sequence le plasmide obtenu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Difficulté d'interprétation de gel d'électrophorèse

- pour les digérés. la bande en plus peut s'expliquer par le fait la digestion n'a pas été complète et qu'il reste des plasmides à l'état superenroulé.  [...] - pour les non digérés. ça marche pas vraiment car si la bande à 4000 est l'état superenroulé alors il devrait être majoritaire et ça voudrait dire que le plasmide linéaire migre au même endroit que le plasmide circulaire ouvert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

Ca t'indiquera si c'est un problème de rendement de plasmide au cours de la croissance bactérienne ou si tu perds ton plasmide pendant la purification.  [...] J'ai fais un test de purif en combinant les réactifs du kit et une extraction au phénol chloroforme sur 1.5ml de précultures que j'avais gardées et j'ai obtenu de 20 à 80 µg de plasmides. Visiblement mon problème venait de la purif, les colonnes ont peut-être été saturées par trop de bactéries.  [...]

[Génétique] kit qiagen

on va peut être me crier dessus mais voilà j'ai un souci j'ai fait un tp où l'on utilise le plasmid Mini kit (100) de QIAGEN pour une extraction plasmidique et je cherche à savoir de quoi est composé ce kit.  [...] J'utilise le même type de kit mais chez Sigma et ils sont aussi avares en infos... Mais en fait à mon avis c'est simple. regardes les protocoles dits classiques d'extraction de plasmides et il n'y a pas de mystères les kits sont fait avec les mêmes produits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clone sans ADN

Lors de l'extraction d'ADN, (j'ai tenter le mini-prep maison et le kit mini-prep biobasic) je n'obiens aucun ADN lors de la migration sur gel d'agarose. J'ai répété l'expérience plusieurs fois, à partir du début, ma superviseur a testé également les clones et à chaque fois, il n'y a pas d'ADN.  [...] Vous sélectionnez avec de la kanamycine ou de la spectinomycine La carte de chez stratagene (qui produit le plasmide que vous utilisez) indique qu'il y a dedans un gène de résistance neo/kana. On peut se demander si vos bactéries résistent à la spectinomycine.  [...]