• Santé - Extraction, Cellules, Concentration

[Urgence] question

Voilà mon problème je microdissèque des cellules cancéreuses de prostate et je me demandais quelle était la quantité d'ARN dans une seule de ces cellules. Comme je fasi de l'extraction avec passage sur puce ensuite, cela m'aidera beaucoup.  [...] Personnellement, avant de faire ma RT PCR, je fais une extraction sur 1 million de cellules pour obtenir une concentration de 0.18 microgramme/microlitre.  [...]

[Biologie Cellulaire] Calculer la concentration en mitochondries issues d'une extraction.

Nous pensons faire une extraction de mitochondries thermogènes et en mesurer la concentration pour que nous puissions travailler sur un même échantillon.  [...] - est-il possible de calculer la concentration de mitochondries a partir d'une mesure spectrophotométrique (genre à partir d'une courbe étalon ou autre).  [...]

[Biologie Moléculaire] préparation d'une solution de phénol

bonjour, j'ai lu les postes qui ont traité la question du phénol mais ma question demeure sans réponse, je compte faire une extraction d'ADN à partir de cellules fongiques et j'ai buté pour la préparation du phénol, j'ignore avec quoi il doit être dissout et à quelle concentration, je cherche de mon coté mais si quelqu'un peut m'orienter ce sera chic.  [...] Je ne pense pas qu'il soit dans votre intérêt de préparer vous même votre phénol. C'est toxique et vous n'en avez pas l'expérience ce qui risque d'impacter le résultat de votre extraction. Or j'imagine que votre but est de ne pas bousiller votre matériel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

le phénol et le chlorophorme permettent de solubiliser d'une part les protéines et les lipides d'autre part, cela fait partie de l'extration à part entière ou bien ces produits interviennent-ils également dans la lyse des cellules.  [...] pour la suite du protocole d'extraction d'ADN, on utilise le phénol et le chlorophorme à partir de notre lysat cellulaire c'est bien ça ou bien doit-on préalablement centrifuger pour éliminer l'eau.  [...]

[Biologie Cellulaire] extraction protéique (ERK1/2) à partir de cellules U2OS

je suis un nouveau dans ce forum, j'ai un soucis, je voulais faire des culots cellulalires à partir des boites 35mm de cellules transfectées, la derniere fois javais pas beaucoup de prot en dosage lowri sachant bien que je gratte ma boite de cellules dans du PBS et je centrifuge 1000 RP 2min, après je lyse mes cellules dans du leamli 2X et je l'ai dose et ce que kelk'un pourrait me donner un protocol.  [...] j'ai une autre question differente je voulais peter un culot de cellules cultivées dans des boites 35mm j'utilise le grattage dans du PBS 1X la kestion à combien je centrifuge pour avoir un bon cult sachant que la derniere fois javais presque rien de materiel lors du dosage lowry.  [...]

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN Lignée cellulaire et Bactérie

J'aimerai profiter de votre savoir vis à vis de l'extraction d'ARNm dans le cas suivant. Je vais mettre en culture des bactéries (lactique) sur des cellules (HT-29) pendant quelque. En fin de cinétique j'aimerai pouvoir isoler l'ARN Bactérien ainsi que l'ARN eucaryotes.  [...] même si je ne vois pas bien l'intérêt de mettre des bactéries en culture sur des cellules si tu veux séparer les ARNm distinctement pourquoi ne pas essayer une centrifugation. Ensuite tu extraits une des deux ou les deux phases et tu fais ton extraction.  [...]

Concentrer

Typiquement, pour de l'ADN, il existe des protocoles visant à le faire précipiter, puis après re-suspension dans un volume moins élevé, on obtient une solution plus concentrée.  [...] Généralement un ADN plus concentré est plus facile à manipuler, pour le diluer à la concentration voulue, pour faire des PCR plus efficaces.  [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Je dois trouver le rôle de chacun des composants d'un tampon de lyse précédant l'extraction d'ADN (extraction phénol - chlorophorme) à partir de cellules animales. Quelqu'un pourrait-il me confirmer ou infirmer les rôles supposés.  [...] EDTA - chelateur d'ions bivalents - inhibition de nucléases et dénaturation de structures contenant du calcium.   [...]