• Santé - étapes, Clonage, ADN

Une première : le génome d'un organisme vivant intégralement reconstruit

L'équipe a ensuite suivi un protocole en cinq étapes consistant à réunir les fragments entre eux, formant des assemblages de plus en plus importants évoluant vers la reconstitution complète d'un génome synthétique de M. genitalium. Dans un premier temps, des groupes de quatre fragments successifs ont été produits, obtenant 25 assemblages comprenant chacun environ 24.  [...] 000 paires de bases (24 kb). Ceux-ci ont été introduits dans une bactérie Escherichia coli afin d'obtenir, par clonage, suffisamment d'ADN en vue des prochaines étapes ainsi que pour en valider la séquence.  [...]

Technique ADN recombinant

1)Ce que je ne comprend pas c'est que une fois que l'adn à été intégré dans le site de clonage sur le plasmide il fait en sorte que la beta-galactosidase n'est pas produite par lacz du moins pas une beta-galactosidase fonctionnelle.  [...] 2) pour le puC19 qui contient un mcs (multiple cloning site) comment se fait-il que le mcs qui consiste donc en des séquences spécifique de nucléotides si j'ai bien compris ne perturbe pas la lacZ vu qu'il est en plein dans le gène si j'observe bien l'image suivante ( je joins l'image).   [...]

[Biologie Moléculaire] stratégie de clonage.

Malgré mon cours d'ingénierie des protéines sur la stratégie de clonage,j'ai beaucoup de mal a me faire une idée claire de la méthode de clonage et de ses différentes étapes sur des adn eucaryotes.Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer avec ses mots comment cela se passe en général pour des séquences connues,partiellement connues et inconnues.  [...] Merci quand même de m'avoir répondu, je reconnais que ma question est pas très claire mais c'est parce que j'ai un peu de mal a me faire un idée concrète du déroulement du clonage même si je pense avoir plus ou moins compris mon cours, je le relis de plus en plus et ca rentre de mieux en mieux.  [...]

[Biologie Moléculaire] purification d'épisome et CsCl gradient

Afin de pouvoir faire cette étape de clonage de mes petits épisomes chéris j'ai besoin de beaucoup d'ADN et d'après plusieurs personnes la seule façon d'avoir assez d'ADN extrachromosique serait de faire un gradient de césium.  [...] Enfin, si tu veux de l'ultra-pure, tu peux réaliser un second gradient, en utilisant les fractions que tu as récupéré et choisit à l'étape précédente. pour cela, tu mixes tes fractions, calcul l'indice de refraction (et donc la densité en Césium), et finalement calcul qu'elle sera la densité idéale pour la phase lourde de Césium (par exemple, une phase légère avec echantillon à 1.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

.. A partir de là, il ne sert à rien de continuer le sous-clonage tant que les étapes avant ligation ne sont pas bien optimisées.  [...] Cette enzyme va ligaturer deux brins d'ADN par création d'une liaison phosphodiester. Dans le cas du clonage voici les étapes nécessaires à son fonctionnement.  [...]

Augmenter la capacité d'1 plasmide??

Ben, c est un cosmide je pense, dans mon cours on me dis qu on peut augmenter la capacité d un plasmide en faisant d abord un clonage avec un ADN genomique puis...puis je comprends plus rien. c est pour augmenter la quantite d ADN a incorporer...plus on met des sites cos plus on peut y inserer des choses.  [...] .c est avec un phage lamba je pense...on dis qu on peut supprimer des choses pas interressante hors du cosmide formé, mais une fois qu on a des site de clonage et des sites cos, c est bon, non je vois pas trop de dif avec le clonage en fait.  [...]

[Biologie Cellulaire] ADN mitochondrial et clonage

Dans le cadre de mes études je m'intéresse au clonage humain. N'étant pas étudiante en biologie mes connaissances sont donc limitées...J'aurais aimé savoir s'il existe des études sur le transfert de l'ADN mitochondrial d'une cellule à une autre. Je m'explique.  [...] Pierre Roubertoux et son équipe ont réussi à démontrer l'influence de l'ADN mitochondrial sur le comportement de souris. Or, lors d'un clonage par transfert de noyau, 2 types d'ADN d'origine différentes sont en présence (l'ADN mitochondrial de la cellule receveuse et l'ADN nucléaire du noyau transplanté) de fait un clone n'est pas la copie conforme (même génétique) d'un original.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et Clonage

s.v.p j'aimerai bien comprendre la différence entre la PCR et le clonage autrement dit est-ce-que lors d'une amplification de l'ADN le choix entre une PCR et le clonage se fait d'une manière aléatoire ou bien y'a des règles a suivre.  [...] La PCR permet d'amplifier une portion d'un génome d'ADN selon les amorces que tu choisis. Le clonage consiste à insérer un morceau de gène à l'intérieur d'un ADN.. (souvent dans celui d'E.coli via un plasmide, dit vecteur).  [...]

[Génétique] Génie Génétique !!!

Pourquoi ne pas essayer d'expliquer le principe du clonage J'entend le clonage moléculaire (multiplication à l'identique des fragments d'ADN).  [...] Sinon, tu peux expliquer ce qu'est une PCR en la présentant comme la technique permettant d'amplifier le nombre de molécules d'ADN, très utilisée en criminologie (sujet à la mode).  [...]

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

Si c'est bien ça. tu as raison, en clonant ton gène dans le gène TetR, tu l'innactives donc, si tu mets les bactéries en présence de tétracycline, tu vas les tuer et tu n'auras pas ton clonage.  [...] Reste à repérer les clones en question sur la première boîte et à les amplifier, avant de vérifier qu'on a bien le gène d'intérêt dans le plasmide (par un coup de séquence par exemple...).   [...]