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La protéine du cancer du sein, BRCA2, est enfin purifiée

Mais la purification d'une protéine est un chemin semé d'embûches. Chaque étape peut vite devenir un problème. le clonage du gène, l'expression de la protéine dans des cellules (spécialement modifiées pour sécréter en grande quantité le produit du gène inséré), la séparation de la protéine de tous les autres constituants de la cellule, sa solubilisation.  [...] Les trois équipes, qui ont respectivement publié leurs résultats dans Nature et Nature Structural & Molecular Biology, ont ajouté des tags, c'est-à-dire des peptides fusionnés en bout de protéine pour améliorer la solubilité et le repliement de BRCA2 et donc favoriser sa stabilité.  [...]

[Biologie Cellulaire] Détergent pour cellule humaine

je suis confrontée à un problème. je travaille sur l'expression d'une proteine virale dans des cellules humaines que je ne parviens pas à solubiliser après extraction des protéines cellulaires. Un protocole est déjà au point pour l'expression chez la bactérie et la levure et cette étape de solubilisation permettant d'extraire la protéine des membranes fonctionne et pour cela nous utilisons du Chaps.  [...] ce sont des cellules HeLa qui sont adhérentes, pour répondre à vinc j'ai déjà essayé le laemli qui est compatible avec la spectro mais la solubilisation est mauvaise. Je me demande plutot s'il y a des détergents vraiment spécifiques des cellules humaines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème d'extraction d'ARN

A priori, une extraction au Trizol permet d'éviter les problèmes dus au mucus mais ça m'arrangerait vraiment d'utiliser le kit.   [...] Si je ne me trompe pas, les mucus sont généralement constitués de polysaccharides. Normalement dans les kits d'extraction d'ARN, il y a une étape de solubilisation dans de l'éthanol 70%. Essayes peut-être de répéter cette étape, qui permet en priorité de se débarrasser des protéines en les précipitant, mais cela peut peut-être aider à se débarrasser aussi des polysaccharides du mucus.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS page

Je met SDS et urée justement pour ne pas avoir une concentration trop élevée en urée à mettre ce qui pose déjà problème dans mon dosage de protéine que j'effectue avant de déposer mes échantillons, juste après la solubilisation.  [...] Idem pour le SDS. Mais en soit à la base ils jouent le même rôle seulement j'ai fait pas mal de tests et pour mes échantillons, le fait de coupler les deux réduit considérablement le temps de solubilisation de mes échantillons.  [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

Surtout les protéines membranaires qui nécessitent très souvent d'être entourées de lipides pour que leur structure 3D soit maintenu. Il faut donc trouver le bon compromis entre solubilisation de la membrane/maintien de la forme native des protéines. Je te déconseille la sonication qui est dénaturante.  [...] 100% d'accord. Après comme tu le dis, délicat dosage extraction - solubilisation - protection. Tu devrais essayer sur des échantillons qui ne sont pas précieux à quelle limite de détergent tu arrives à solubiser ton récepteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilisation de protéines

J'ai réussi à faire exprimer en BL21 ma protéine d'intêret mais je n'arrive pas à la solubiliser par le Tx-100 et SB3-14.  [...] Est-ce que quelqu'un aurait un protocole efficace de solubilisation par l'urée.  [...]

[Biochimie] Triton X 100

Si quelqu'un parmis vous à la réponse. j'aurais besoin de connaître le mode d'action et le rôle du triton X 100 sur une protéine. et si il possède une activité scpetrométrique susceptible d'interférer avec un dosage protéique par spectro.  [...] le triton est utilisé comme détergent et permet la solubilisation des protéines (notamment les protéines ancrées).  [...]

Natrémie et pression oncotique

Les ions simples peuvent certes aider à la solubilisation des protéines mais, de ce que j'en comprends, c'est en équilibre avec le reste du solvant aqueux.  [...] La pression oncotique va influencer les mouvements d'eau par osmose (au niveau du rein par exemple) et les ions Na étant entrainés par leur gradient, si l'eau s'en va ils vont etre plus concentrés et si ils le peuvent ils vont eux aussi bouger d'un compartiment a l'autre pour rééquilibrer, si ils ne peuvent pas alors oui la concentration aura augmenté.   [...]

[Biochimie] pH protéines hydrosolubles animales

Le pH des protéines hydrosolubles n'a pas d'importance dans la solubilisation des protéines. Il faut simplement être dans un tampon permettant de maintenir les protéines en solution.  [...] Comment pourrai-je vérifier que les protéines d'intérêt sont bel et bien dans ma solution Par un dosage par la méthode de Bradford par exemple.  [...]

Rôle de l'EDTA dans dans l'isolement de l'ADN

De l'EDTA dans une solution de solubilisation cellulaire va permettre, en chélatant les cations bivalents (Mg2+. Ca2+), de rompre les jonctions entre les cellules à dissocier d'un tissus (ici les tissus du thymus). En éffet, Les protéines permettant la jonction cellulaire (ex.  [...] cadhérines) fonctionnent en présente de ces cations. Le faite de les chélater (les cations) entraîne donc une inefficience des protéines de jonctions, et donc une séparation des cellules d'un tissus.  [...]