• Santé - étape, Cobalt, Protéine

[Biotechnologie] Gel filtration

Tout d'abord merci de la réponse rapide, mais je posait plus la question pour savoir l'utilité, car dans mon protocole je sors d'une chromatographie d'affinité au cobalt, ensuite je clive le tag histidine de mes protéines, dialyse toute la nuit, ensuite je repasse sur du cobalt pour eliminer les prot non clivées, et la je fais la GF, et j'avoue trouver ça étrange sachant qu'on viens juste de purifier la prot, et qu'on l'a nettoyé de l'imidazole (dialyse).  [...] Meme apres cette premiere etape de purification au cobalt la purete de ta proteine n'est pas absolue, c'est pourquoi on ajoute generalement d autres etapes, comme colonne echangeuse d ion et generalement on fini par une gel filtration pour ajouter un degree de purification (en fonction de la taille), tu vois egalement si ta proteine est monodisperse ou agregee.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

La protéine d'intérêt fusionnée en N-terminal à la GST a été exprimée chez E. coli puis purifiée sur résine cobalt (lavage en batch). La protéine de fusion a été clivée à la thrombine. La protéine d'intérêt est éluée par simple centrifugation. La protéine de fusion toujours accrochée à la résine est éluée avec de l'imidazole.  [...] Voici les volumes géneralement utilisés pour préparer un gel qui permet d'observer des protéines ayant un poids moléculaire compris entre 10 et 200kDa.  [...]

[Biologie Moléculaire] His-tagged protein ?

Pouvez-vous s'il-vous-plaît m'indiquer en quoi consiste la méthode de marquage de protéines avec une chaîne d'histidine.  [...] On ajoute 6 histidine en début ou en fin de protéines. Ces molécules ont une grande affinité pour le cobalt ou le nickel. Ca simplifie les protocoles de purification en ce sens que l'on est plus obligé d'utiliser un protocole spécifique de la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Si tu travailles à partir d'un extrait protéique brut, ton gel coomassie contiendra beaucoups de bande mais dans le cas d'une surexpression de ta protéine d interet, la bande proiminante devrait migrer comme celle de ton WB.  [...] Puisque je produis moi même mes protéines je peux les associer à un polyhistidine (plasmide type pET) et faire une colonne avec du cobalt ou faire un système GST (là je ne connais le nom des plasmides). Je reprends la colonne d'affinité mais je m'affranchis des spécificités de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

2) J'ai fait un suivi de la protéine en prenant des aliquots à chaque étape de purif. Je retrouve ma protéine dans le surnageant, des traces minimes dans les lavages et elle est à la bonne taille. En revanche la fraction purifiée (éluat) donne une bande légèrement en dessous des autres.  [...] En effet, les histidines fixent moins bien le cobalt que le nickel, et donc seules les protéines qui ont beaucoup d'histidines (comme une prot avec un 6His ) se fixeront. L'utilisation du cobalt augmente donc bien la spécificité.  [...]

Science décalée : quand Dr House aide un médecin à soigner son patient

La prothèse de la hanche du patient, en métal, a été abîmée. Le cobalt et le chrome circulaient donc à un taux anormalement élevé et toxique dans le sang, à l'origine de tous ses symptômes. J. Schefer et al., The Lancet.  [...] Mais les troubles liés aux prothèses de hanche restent bien moins fréquents. En effet, bon nombre d'entre elles se composent de cobalt (70 %), de chrome (25 %) et de molybdène (5 %), qui assurent la bonne qualité et la stabilité de la structure. Généralement, tout se passe bien.  [...]

[Biotechnologie] [sels] dans un tampon

En chromato d'affinite au metal comme cobalt ou nickel avec TAG histidine, le sel n'influe pas sur la fixation TAG. -. resine, en revanche cela permet de limiter les fixations non specifiques de tes proteines (dues au charges).  [...] Le TCEP est un agent reducteur tout comme le DTT, suivant le pH de tes tampons l'un est preferable a l'autre. Mais les deux sont la pour eviter l'oxidation de tes proteines (notamment des cysteines).  [...]

Le scénario de l'origine de la vie enfin déterminé ? - Page 6

Au sens large, les MP incluent. metalloenzymes du métabolisme à role redox (SOD, Chlorophylle, Metalloprotéases,…), métalloprotéases matricielles (MMPs à Zn. collagenases, gélatinases, emasatases...), mais aussi porphyrines (hemoglobine), cytochromes (redox et respiration), rubredoxin (protéine a Fe & S, redox), plastocyanine (a Cu - role redox aussi),  [...] Ïau dela du Fe, Ni cités ci-dessus, d'autres métaux de transition présents dans les fumeurs blancs sont complexés. Metalloprotéines à Cu2+ (Cytochrome oxidase, Plastocyanin. hemocyanin), Zn2+ (Carboxypeptidase A), Cobalt,... Et des métaux alcalino-terreux.  [...]

Couronne dentaire - toxicité ?

Mais je m'interroge et angoisse énormément depuis hier quant à la toxicité des poussières produites. Ces inley sont faits de cobalt et chrome, alliage soi disant bio compatible. Mais est ce vraiment sans risque Car j'ai forcément avalé cette poussière métallique.  [...] LA dose de cobalt que vous avez éventuellement absorbée ne doit pas du tout vous inquiéter d'après cette fiche de l'INRS...et au moins 80% sont déjà évacués.  [...]

[Biochimie] Quelle résine Nickel pour purifier mes protéines?

Ta pas que cette étape de purification pour ta prot de toute façon j'imagine Sinon une ionique et une GF derrière et ta prot sera 100% pure.  [...] Je parle de résine Cobalt parceque apparement elle est plus spécifique que la résine Nickel mais je n'ai jamais essayé.  [...]