• Santé - Enzymes, Restrictions, Plasmide

[Biologie Moléculaire] hydrolyse du plasmide avec des enzymes de restrictions EcoR1 et Hind3

bonjours a tous je voudrais de laide a propos d'un TP qu'on a fait en biomol en fait on a pris un eppendorf avec dedans plasmide purifié+EcoR1+tampon+eau et on a incuber a 37°C ce que je voudrai savoir c'est linteret de cette incubation.  [...] EcoRI est une enzyme de restriction =. ça va couper ton plasmide en faisant de sticky ends et tu vas pouvoir mettre quelque chose dedans à condition que cette séquence ait les mêmes sticky ends.  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

L'ADN recombinant le but est de prendre un gène (ou une version-. allèle) et de le multiplier afin de pouvoir dans un second temps travailler dessus (séquencage par exemple). Donc à l'aide d'enzymes de restrictions qui reconnaisses certains sites (suite de nucléotides) on va couper le plasmide afin d'insérer notre gène.  [...] Il faudra bien choisir les enzymes de restrictions selon le plasmide mais également leurs séquences (par rapport à notre gène) car on va l'insérer grâce à la complémentarité des bases.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]

[Microbiologie] Taille de plasmide

j-ai les enzyme de restriction BamHI,EcoRI et PstI,COMMENT SAVOIR ESQ CES ENZYMES ONT DES SITES DE RESTRICTIONS POUR LE PLASMIDE pGEM-T ET SI C-EST OUI COMBIEN DE SITE SVP DES REPENCES SONT LES BIENVENUE.  [...] C'est facile pGEM-T est un vecteur de sous-clonage commercial. La carte plasmidique est disponible sur internet. A partir de là un enfant de 6 ans trouverai le nombre de site de restriction pour ces 3 enzymes.  [...]

Comment vérifier orientation d'un insert?

alors voilà, j'ai beau tomber sur des questions similaires, j'ai toujours du mal à comprendre comment l'utilisation d'enzymes de restrictions peut nous renseigner sur l'orientation d'un insert dans un plasmide.. J'ai beau chercher des schémas, je n'en trouve pas.  [...] _ si je l'insère à la suite d'un promoteur déjà présent dans le plasmide, là, forcément, je dois le mettre dans le bon sens, ou il se retrouverait sans promoteur pour initier la transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Je dispose de deux enzymes de restrictions, une XhoI qui possède deux site de restriction dans la cassette de polyclonage. l'autre enzyme est MluI cependant sur le schema du plasmide je n'ai pas son site de restriction donc je ne sais pas ou elle coupe.  [...] oui tu peux, sous certaines conditions. Il faut un site de restriction dans le vecteur, et un autre dans l'insert (pas au milieu de l'insert). Selon que l'insert est dans un sens ou dans l'autre, tu auras deux fragments différents en taille. Pour l'histoire du plasmide natif j'aurais dit que c'etait le vecteur seul.  [...]

Genes dans l'ADN

Et denda, je vient de me rendre compte qu'on s'est mal compris au niveau du liquide. Je m'explique. Lorsqu'on fait une manipulation génétique avec base des bactéries, on prend un bout de gène de sur un chromosome que l'on sectionne à l'aide d'enzymes de restrictions.  [...] Ensuite on prend un plasmide (qui se trouve effectivement dans le cytoplasme ) et toujours à l'aide des enzymes de restrictions, on ouvre le plasmide de sorte qu'au lieu d'avoir une forme plus ou moins ronde il a maintenant la forme d'un C. Par la suite on met le bout de gène que l'ont a sectionnée plus tôt et le plasmide dans une sorte de liquide.  [...]

Qui a découvert le cancer?

Donc en fait on a commencé à approcher le truc grâce aux virus. Ensuite il y a eu la montée de la biologie moléculaire moderne dans les années 60/70 avec la découverte des transformation bactérienne, des enzymes de restrictions, du clonage, etc... C'est dans ces années qu'on a réussit à couper une séquence, la coller dans un plasmide, et la cloner.  [...] ... Donc avec tous ces outils on était capable d'investiguer les processus de cancérisation avec plus de précisions. Et à la fin des années 70 mais surtout pendant les années 1980, on a réellement commencé à comprendre les bases moléculaire du cancer grâce nottament à Bob Weinberg et Michael Wigler (et tous leurs collaborateurs, thésards et post-docs) qui sont (selon moi) les 2 géants de la cancérologie moléculaire.   [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation de l'ADNc

Y a t'il d'autre utilisation d'adn complementaire hormis l'introduction de ces ADNc dans des plasmides pour l'obtention d'une grande quantité d'adnc.  [...] Moins de problèmes de PCR, moins de problèmes pour les intégrer dans des plasmides, moins de problèmes pour la transfection (plus le plasmide est gros, moins la transfection est efficace), moins de problèmes pour choisir des enzymes de restrictions qui ne coupent pas à l'intérieur de notre séquence d'intérêt, et j'en passe.  [...]

interpretation electrophorese d'un plasmide purifié

Il va falloir plus de détails, quand tu dis purifié y a t-il eu digestion par enzyme de restriction après Parce que ça ne m'a pas l'air d'être du plasmide circulaire tout ça. De plus il y a plusieurs puits pour la même chose.  [...] OK merci bcp. j'ai aussi un autre problème avec cette fois ci une électrophorèse ou on a utilisé des enzymes de restrictions EcoR1 et Hind3 avec notre plasmide.  [...]