• Santé - Enzymes, Restriction, Collants

[Biologie Moléculaire] ligation

Par exemple, lorsque tu fais ta digestion, il est conseillé de faire des témoins négatifs (sans enzymes de restrictions), des témoins positifs (lors d'une double digestion, tu vas faire deux témoins de simple digestion), puis tu vas faire migrer le tout (ton produit de digestion, tes trois témoins) sur des gels d'agarose.  [...] - Soit on clive le vecteur avec deux enzymes de restriction différentes qui génèrent des bouts collants incompatibles. L'insert est clivé avec les même enzymes. Cette méthode a l'avantage d'empêcher la recircularisation du vecteur et favoriser une insertion orientée de l'insert dans le vecteur.  [...]

fragment de restriction

Bonjour à tous, j'ai un petit soucis concernant les fragments de restriction. Que j'aie un gène qui soit clivé soit par des enzymes de restriction générant des bouts collants 5' ou 3' sortant, si je mets dans mon milieu réactionnel une DNA polymérase avec des nucléotides amorce etc elle va m'allonger ces 4 fragments sans problème ou bien est ce que 3' sortant je n'ai pas de groupement OH donc pas possible d'allonger.  [...] C'est le principe d'une PCR. Par contre les extrémités cohésives des fragments peuvent s'hybrider avec un des autres fragments créant ainsi une sorte de fusion. Mais comme le groupement 3' des tes fragments ne contient pas de OH normalement la polymérase seule ne devrait pas pouvoir allonger/compléter les trous de ton brin d'ADN.   [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.  [...] L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.  [...]

enzymes de restriction

Bonjour à tous, j'ai lu dans la description des enzymes de restriction. Produites par les bactéries, les enzymes de restriction sont un moyen de se défendre contre les infections par des virus ça veut dire que ce sont seulement des enzymes produites in vitro, pas in vivo.  [...] d'accord merci. http.//biologie.univ-mrs.fr/upload/p...diantfinal.pdf (page 2 le mode d'action des enzymes de restriction) les enzymes générant des bouts collants vont a chaque fois couper après un G ou ça dépend et ceci est seulement un exemple qu'est ce qui confère a l'enzyme sa faculté a généré soit des bouts collant 5' soit 3'.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants.  [...] Et le positionnement de ces séquences se fait en accord avec le futur cadre de lecture de chacun des ADNc. Après ligation, on clive avec l'enzyme de restriction et on met les ADNc ensemble et en présence de DNA ligase (la IV je crois..) et avec de l'ATP. C'est un grand raccourci que j'ai pris là, juste pour se faire une idée.  [...]

fromage qui colle...

Qui ne se serait jamais posé cette question en mangeant du riz au gruyère et autres spécialités incluant du fromage fondu.   [...] Qu'est-ce qui se passe au niveau moléculaire pour qu'on passe d'une pâte plus ou moins solide à des fils collants si caractéristiques Je suppute qu'il y a de la dénaturation protéique dans l'air (miam.) mais encore Quelle mécanique sous-tend cette transformation assez spectaculaire alors qu'un sérum va coaguler à la chaleur et nombre d'enzymes précipiter Est-ce dû aux lipides pour une partie Autre chose.  [...]

enzymes qui génèrent des bouts collants

Bonjour à tous, est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer la notion de bout collants générer par des enzymes Je sais que l'Enzyme BAM H1 reconnait 6 nucléotides. elle scanne la molécule d'ADN et quand elle reconnait la séquence d'ADN, elle se fixe dessus en clivant la liaison phosphodiester.  [...] Le nucléotide a deux extrémités - une 3' et une 5'. On se sert de cette orientation notamment pour définir le brin et l'anti-brin d'un allèle génétique.   [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

C'est ce que jai fais car ce sont les questions précedentes et oui on retrouve les sites de restrictions, il suffit juste donc de faire ca Ca me semble trop simple ^^.  [...] effectivement, certaines enzymes de restriction générant des extrémités protrusives (par franches = blunt) peuvent être cohésives. Dans ce cas, généralement on ne peut pas recouper avec les 2 enzymes utiliser au début. Si tu peut trouver un livre de NEB (New England Biolabs) ou peut être sur leur site, tu as un tableau qui récapitule tout.  [...]

[Zoologie] Elimination des souris

Je crois que je vais essayer les pièges collants,je suppose qu'il ne faut pas les prendre chez LIDL si on veut que cela soit efficace.  [...] Je mets du poison dans le grenier,et si non je vais mettre des collants en plus des tapettes (les pertes sont lourdes en tapettes aussi,j'ai perdu 3 pièges en moins d'un an,souris qui a réussi à partir avec le piège chat qui a tout embarqué un rat.  [...]

Changements des recommandandations ERC et formation AFPS

Dernier changement. un seul choc électrique au lieu de 3. difficile à réaliser avec des défibrillateurs automatiques s'ils ne sont pas réglables (autrement dit seulement pour la défibrillation à déclenchement manuel des équipes de secours)... sachant que le grand public qui utiliserait les appareils ne connait pas leur fréquence et aura du mal à les arrêter sans toucher la victime pour ôter les collants.  [...] et s'ils le font, les collants risquent de ne plus être utilisables (particulièrement celui sous l'aisselle gauche) et provoqueront des brulures douloureuses si on les réutilise du fait d'un contact insuffisant.  [...]