• Santé - Enzyme, Restriction, Niveau

extraire de l'ADN

Non, une enzyme de restriction coupe au niveau de la liaison 5'-3' phosphodiester entre 2 nucléotides sur les 2 brins, en aucun cas elles ne vont séparer les 2 brins d'ADN (c'est plus le rôle des hélicases par exemple).  [...] La méthylation (dans le cadre de la protection contre des enzymes de restriction) est effectué par des méthyltransférases qui vont reconnaître un site de coupure d'une enzyme de restriction et vont ajouter un groupement méthyle au niveau de ce site (souvent au niveau d'une cytosine).  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Alors voilà. On a le plasmide pBSK qui fait 3 kb. Le technicien de laboratoire a dans un premier temps clivé ce plasmide grâce à une enzyme de restriction (EcoRI) au niveau d'un site multiple de clonage situé au niveau de l'opérons lactose puis l'a transféré dans une bactérie d'E.  [...] Concernant ta question du puit 6, je serait presque pret à parier que ce que tu vois est ton plasmide B (donc ta matrice) mise en trop grande quantité. Ca ressemble à du plasmide et comme ni ta pcr dans le puit 5 (tu as parlé d'une erreur de manipulation) ni dans le puit 7 (pourquoi) n'ont fonctionné, je serait tenté de dire qu'aucune de tes PCR n'a marché malheureusement.   [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

2.maintenant si une enzyme de type deux ce met sur un fragment methylé elle ne coupe pas ma question c est d ou est venu la methylation de l adn vu que c est l enzyme de restriction qui est aussi methylase.  [...] pour la 4 je sais. les enzyme de restriction son specifique a un palindrome (sequence d'adn invariante reconnu par l'enzyme de restriction) donc si il ya mutation au niveau de ce palindrome specifique l'ensyme de restriction ne coupera plus a cette endroit de l'adn.  [...]

[Biologie Moléculaire] marqueurs moleculaires

Alors dire polymorphisme RFLP c'est redondant car dans RFLP il ya déjà écrit polymorphisme (Restriction fragment length polymorphism=Polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...] De l'ADN est coupé en fragments par une enzyme de restriction, cette dernière coupant l'ADN au niveau d'une séquence qui lui est spécifique (site de restriction). Les fragments d'ADN ainsi obtenus, nommés fragments de restriction, sont ensuite séparés selon leur longueur par électrophorèse sur gel d'agarose, on obtient un profil.  [...]

levure s. POMBE

.. Enfin, d'après ce que j'ai pu lire sur les étapes que tu as proposé, selon moi (je tiens à préciser que ca n'engage que moi) cela parait correct. J'aurai juste précisé les techniques qui permettrai d'isoler le peptide (enzymes de restrictions, amplifications du peptide, etc), d'insérer le fragment d'ADN de manière stable dans la levure (si possible sur des plasmides à haut niveau de réplication genre 2microns), et j'aurai précisé pourquoi choisir S.  [...] Effectivement, ce que je voulais dire au niveau de l'enzyme de restriction, c'était au niveau de la séquence codante pour le peptide... et non pas le peptide en tant que tel.  [...]

HOMME ARAIGNÉE POSSIBLE??!! Débats

Il faut déjà identifié le gène qui permet à l'araignée de produire de la soie puis l'isolé grâce a des enzymes de restrictions ( qu'il faut trouvé ) mais encore pire il faut déjà trouvé des séquences de reconnaissance ou spécifique qu'on appel palindrome pour que l'enzyme de restriction identifie le gène a clivé, au niveau de l'Homme on connait pas mal d'enzyme de restriction de type endonucléase de type 2 donc ça pourrait aller mais pour l'arraigner je pense pas.  [...] Azaar. tout est mélangé, c'est un peu le bazar dans cette réponse qui ne fait pas avancer le débat. Les enzymes de restriction c'est loin d'être un problème ici.  [...]

enzyme de restriction Hin1II

je suis une étudiante en première année de thèse et j'ai un problème avec la détection d'un polymorphisme au niveau du promoteur IGF1 rs35767 par RFLP. j'ai utilisé l'enzyme de restriction Hin1II ou appelé aussi NLaIII mais j'ai eu une digestion dans tous les individus que j'ai testé alors que la mutation est rare dans la population caucasienne et elle est seulement de 10%.  [...] 16°c n'est pas la température recommandée mais cela permet de diminuer l'activité non spécifique de l'enzyme. J'ai déja travaillé de cette manière pour effectuer des digestions partielles ou encore des digestions relativement difficiles.  [...]

[Biochimie] Bacterie E.Coli

...c'est pour simple raison..car la bactérie echerichia coli nessicite pas bcp d'element nutritifs..et car elle vit dans un simple milieu qui contient des elements simple...et pour autre raison...c'est la reproduction de E.coli s'effectuée dans un temps tres limité.   [...] Voilà, c'est plutot sa la réponse, on utilise E.Coli car c'est une bactérie courante, qui ne présente pas d'exigeances nutritive, qui a un temps de génération rapide (20 à 40 min) et qui est compétente, de plus on utilise beaucoup E.coli car on l'a connait par coeur au niveau de sa structure d'ADN et on a beaucoup d'enzyme de restriction efficace pour l'inclusion des vecteurs plasmidiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] utilisation de serial cloner

Alors j'explique mon problème, je dois faire un clonage avec des sticky ends et quand j'essaye de faire une construction avec serial cloner je n'arrive pas à sélectionner une enzyme pour qu'il coupe lui même au niveau du site de restriction. Est-ce tout simplement possible Si non comment faites vous.  [...] J'ai aussi une autre question, toujours sur Serial Cloner, est-il possible de couper par une enzyme de restriction et avoir la séquence correspondante à l'ADN linéaire après la coupure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueurs dominants et codominants

Prenons un exemple simple, une enzyme de restriction qui coupe au site de restriction A.  [...] l'enzyme de restriction coupe au niveu du site de restriction et doit générer 2 fragments de restrictions pour le homozygotes et les hétérozygotes.  [...]