• Santé - Enzyme, Coupe, Séquence

[Biochimie] Enzyme de restriction

Tout dépend de ton enzyme de restriction. Il en existe de toutes sortes, celles qui reconnaissent une séquence et qui coupe 100 nucléotides plus loin, celles qui vont couper à l'intérieur de la séquence de reconnaissance, celles qui vont avoir besoin de 2 séquences de reconnaissances mais n'en couper qu'une, ou même encore ailleurs, etc.  [...] Du coup si on nous dit qu'une enzyme coupe la séquence 5'CCCAAA en son milieu, elle coupera aussi une séquence 5'AAACCC (vu qu'elle coupe 3'AAACCC) ou elle différenciera une paire de base AC d'une paire de base CA dans le grand sillon.  [...]

enzymes de restriction

1) exemple avec l'enzyme BamHI qui coupe dans la séquence 5'-G*GATCC-3'. L'enzyme va couper la liaison covalente phosphodiester entre les 2 G de la séquence et va laisser un groupe phosphate 5' exposé et un groupe hydroxyle 3' en retrait. On parle alors d'une extrémité collante 5' (5' cohesive ends, ou 5' overhang ou surplomb 5').  [...] 2) exemple avec l'enzyme Sac I qui coupe dans la séquence 5'-GAGCT*C-3'. L'enzyme va couper la liaison phosphodiester entre le T et le C de la séquence et va laisser un groupe phosphate 5' en retrait et un groupe hydroxyle 3' exposé. On parle alors d'une extrémité collante 3' (3' cohesive ends, ou 3' overhang ou surplomb 3').  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

Pour la question 2. tu dois d'abord savoir ce qu'est une enzyme de restriction (une enzyme qui coupe l'ADN, en reconnaissant une séquence particulière de désoxynucléotides). Les 2 allèles, sain et muté, ont-ils exactement la même séquence.  [...] Imagine que ton enzyme reconnaissent la séquence. ATTGTT, que l'on trouve dans un allèle 1. Si l'allèle 2 est muté et possède à la place ATTCTT, l'enzyme ne coupera pas à cet endroit, alors l'enzyme permettra d'obtenir des fragments d'ADN de taille différente selon que l'allèle possédé par l'individu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

la séquence de ton ADN doit être coupée des deux bords avec la même enzyme que tu utilise pour linéariser le vecteur..de plus, ton site de restriction doit être localisé sur un marqueur de séléction.  [...] 1- ma sequence d'adn doit etre coupe des 2 bords par la meme enzyme. Or je retrouve pas le meme site de restriction 2 fois dans ma sequence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Ah donc si je comprend bien, cette technique permet de récuperer des protéines En gros on se sert de l'étiquette GST de la même manière qu'on se sert des billes pour l'immunoprécipitation.   [...] L'enzyme de restriction SapI coupe la séquence d'ADN SapI et une protéase (dont j'ai oublié le nom) coupe cette même séquence une fois traduite.  [...]

[Génétique] Principe de la technique RFLP

La majorité de ces enzymes coupent le DNA une fois qu'ils ont reconnu une séquence particulière dans celui ci (par exemple l'enzyme EcoR1 coupe dès qu'il repère la séquence GATC).  [...] Grâce à cette méthode on peut caractériser des morceaux de DNA. Chaque gène, ayant un contenu en base spécifique, aura un nombre de fragments spécifique si on décide de le découper à l'aide de l'enzyme. Si le gène A possède 2 fois la séquence GATC il donnera 3 fragments et si le gène B en possède 4 il donnera 5 fragments (et ainsi de suite).  [...]

[Biochimie] RFLP et application !

Tu as 2 allèles ayant au moins un nucléotide muté dans la séquence et qui se trouve avantageusement dans un site de coupure d'une enzyme de restriction, EcoR I si j'arrive à bien décrypter. Donc dans un cas, l'enzyme peut couper ce site, dans l'autre non.  [...] On distingue les allèles parce que leur séquences sont différente si bien qu'en coupant avec une enzyme qui coupe à certains sites on a toutes les chances d'avoir un nombre variable de coupures, ce qui génèrent des bandes de tailles différentes. Donc hétérozygotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] ensyme de restriction

SVP je cherche à savoir les enzyme de restriction qui peuvent dégrader mes microsatellites déjà connu.  [...] est ce qu'il existe un site ou une méthode qui nous permettre de connaitre les enzyme de restriction qui coupe une séquence connu.  [...]

Enzyme de restriction: petite difficulté avec sa définition

une enzyme de restriction reconnait un site (=une séquence) spécifique sur l'ADN et coupe de chaque coté de ce site. Si le site est à l'extrémité d'un brin d'ADN linéaire, alors elle peut couper.  [...] Ces séquences correspondent à ce qu'on appelle une séquence palindromique (qui se lit de manière identique dans les 2 sens). Cela veut dire que dans un grand flot de bases azotées allant de quelques bases à plusieurs centaines ou plusieurs milliers, dès que l'enzyme trouvera cette séquence enfouis dans le code génétique, elle la coupera de manière cohésive, c'est à dire en scindant le double brin en partant d'en haut à gauche entre le G et le A du 5'-3', fait sauter les liaisons entre les AATT complémentaires des 2 brins et finalement coupe encore entre le A et le G du 3'-5'.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas vraiment...une sonde est complémentaire et antiparallèle de la séquence à étudier donc comment rajouter une séquence à l'extrémité 5' Celle-ci ne s'hybride pas Et puis une enzyme de restriction ne coupe que sur un ADN double brin donc je ne vois vraiment pas comment tout cel s'organise.  [...] Mais d'aprés ce que j'ai compris, c'est sur cette partie de l'amorce en trop ou qui ne s'hybride pas qu'on insère un site de restriction. Donc à cet endroit là, comment l'enzyme de restriction va t'elle couper si elle ne peut le faire que sur une région double brin et que le site de restriction correspond justement à une zone non hybridée ou simple brin.  [...]