• Santé - Efficacité, Amplification, Probabilité, Hybridation, Amorces, Quantité, ADN

[Génétique] désignaion d'amorces pour une qpcr

Des amorces dégénérées pour une qPCR Non. Sinon l'efficacité d'amplification dépendra majoritairement de la probabilité d'hybridation de tes amorces et non plus de la quantité d'ADN.  [...] dans la mesure où l'efficacité ne serait pas comparable selon la cible amplifiée, oui. Et attention, une amorce dégénérée est d'autant moins spécifique, c'est à vérifier.  [...]

[Biochimie] séqunçage technologie 454

J'ai une question concernant la technologie 454 (séquençage). Il y a des choses qui m'échappent.Comment les microbilles peuvent-il fixer un ADN à la fois.  [...] Pour UNE microbille donné on a hybridation d'UN ADN sb. Puis on effectue une amplification par PCR (l'ADN sb amplifié va se fixer sur une autre amorce de la microbille et ainsi de suite...) et donc au final pour UNE microbille donnée on a le même fragment d'ADN sb qui sont fixées sur toutes amorces C'est bien ça.  [...]

Questions sur la PCR

Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition.  [...] C'est une question de probabilité, en moles les amorces sont largement majoritaires. Donc même si une partie de l'ADN se réhybride avec son brin complémentaire, la grande majorité s'hybridera avec l'amorce. La taille n'a pas vraiment à voir, ensuite c'est plus une question de Tm (température d'hybridation).  [...]

[Biologie Moléculaire] Détection d'une protéine

j'ai ensuite séquencé mes produits d'amplification (amorces dessinées spécifiquement en 5' et 3' de mon insert) pour vérifier que mon insert était correct et surtout entier. Et là, problème ma protéine est tronquée de 4nulcéotides... (sans doute dû à une mauvaise hybridation de mon amorces et donc mauvaise amplification.  [...] pour le reclonage, oui on y a pense le problème c'est qu'on ne comprend pas pourquoi nos amorces ne ce sont pas hybridées correctement.s.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tm mystère des amorces PCR

Après tout dépend de votre façon de l'utiliser. Perso je crée des multiplex mais sur des bouillons de bactérie où de nombreuses espèces peuvent être présentes, donc les amplifications aspécifiques ou croisées peuvent être assez problématiques.  [...] Je fais de l'identification d'insecte. Je n'ai qu'un seul ADN (inconnu donc) et je cherche à savoir s'il appartient à l'une des 3 espèces ciblées. Je n'ai pas de bouillon, ni de mélanges, donc normalement pas de risques d'amplifications aspécifiques. Mon principal souci demeure dans une hybridation capricieuse des amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Bonjour, pour un travail j'ai besoin de savoir 8 raisons qui justifient une très faible quantité de produits PCR après amplification et 3 raisons qui expliqueraient des produits d'amplification multiples ou non spécifiques.  [...] J'ai oublié (mais mes énumérations ne sont pas exhaustives.). si la température d'hybridation des amorces est trop basse ( = stringence diminuée), l'amplification est moins spécifique aussi.  [...]

Définition | Taq polymérase | Futura Santé

La Taq polymérase est un ADN polymérase utilisé pour l' amplification de l'ADN dans la réaction de polymérisation en chaîne ou PCR ( polymerase chain reaction ). La Taq polymérase est extraite de la bactérie Thermus aquaticus, un microorganisme thermophile vivant près de sources chaudes.  [...] Pour faire une PCR, l'expérimentateur a besoin d'amorces oligonucléotidiques synthétiques qui s'hybrident aux extrémités du fragment à amplifier. Lors de la réaction de PCR qui a lieu dans un appareil dédié, un programme permet de réaliser 20 à 50 cycles avec les mêmes étapes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Explications rapides sur la PCR

Je dirais plutôt que les amorces en excès augmentent la probabilité que celles ci s'hybrident avec l'ADN simple brin, et évite ainsi la renaturation de l'ADN en double brin. On met pas l'ADN en excès.  [...] Enfin, quelqu'un peut-il me faire un petit résumé rapide des avantages / inconvénients / spécificité de ces deux méthodes ( amplification par plasmide, et amplification par PCR ).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR classique - PCR en temps réel !

La PCR, polymerase chain reaction, est un ensemble de réaction visant à amplifier un fragment d'ADN recherché. Pour faire court, on prend des amorces (Brins d'ARN) qui iront s'hybrider au début et à la fin du fragment que l'on veut amplifier. Grâce à une polymérase (Taq.  [...] Je ne sais pas si j'ai été clair... Mais pour résumer, une PCR en temps réel permet de faire EXACTEMENT la même chose que la PCR, sauf qu'en plus tu peux voir l'évolution de ton amplification sur un écran d'ordinateur.  [...]

bandes non spécifiques

j'ai fait une PCR pour amplifier les microsatellites. mais sur le gel mon encadreur m'a dit qu'il ya des bandes noin spécifiques. s'il vous plait qu'est ce que ce la veut dire.   [...] c'est des produits de PCR qui ne sont pas issus de l'amplification de ta cible, par exemple si la température d'hybridation est trop basse par rapport au Tm des amorces.  [...]