• Santé - Eau, ADN, Free

[Biotechnologie] Autoclave

Il vous faut quand même vérifier les indicateurs de stérilisation. scotch à autoclave et/ou ticket sortant de l'appareil indiquant le bon déroulement du cycle.   [...] Stérile oui, par contre il faut savoir si tu veux de l'eau désionisée ou ADN free ou RNase Free.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de l'adn

J'ai extrait de l'ADN génomique bactérien, mais je me pose la question de la durée que je peux le conserver (c'est pour faire des PCR ensuite).  [...] Selon vous, combien de temps ces ADN peuvent être conservés dans un bon état, à -20°C, à 4°C Sachant que les ADN bruts sont dans le tampon d'élution du kit d'extraction, et les ADN dilués dans de l'eau DNase-RNase Free.  [...]

Pureté de l'ADN

08 idem pour le rapport 260/230 qui est en dessous de 2 ceci laisse à croire que mon ADN est contaminé par du phenol que dois je faire pour optimiser mon protocole Aussi j Ai voulu utiliser de l'eau nuclease free comme blanc le problème c'est qu'elle affiche une DO de 0.4 à 260 est ce normal Merci à vous.  [...] '(.'( petite précision j extrait mon ADN à partir de pièce tumorale fixée dans du formol pensez vous que je l'élimine pas assez Je fais des lavages à leau physiologique et des centri...help je désespère.  [...]

[Biologie végétale] synthèse cDNA double brin

Après la RT et l'étape de dégradation avec la RNase, as-tu effectué une purification de tes ADNc pour te débarrasser de toutes les enzymes et tampons utilisés.   [...] J'ai utilise ce kit il y a peu. Sur 6ug d'ARN totaux bacterien, en utilisant des randoms primers j'ai recupere 2.5-4 ug d'ADN double brin.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Autre chose, le fait que les ADN soient partiellement dégradés peut être un problème selon la technique utilisée après et il est vrai qu'utiliser des produits DNAse free peut être envisagé.  [...]

RT PCR one step de quiagen

On utilise de l'eau ultra pure autoclave pour preparer nos tampons de l'eau RNase free fourni dans le kit, de la RNase inhibitor des cones a filtre, des cone autoclave. on travaille sous la hotte. on met les UV avant de travailler et on désinfecte les paillases avec du RNAse away.  [...] Revoyez exactement la séquence des evenement chez vous et dans l'autre labo. Il doit bien y avoir une source de contamination en ADN génomique (une fois que vous aurez éliminé l'hypothèse des oligo mal choisis).  [...]

[Biologie Moléculaire] Résultats de PCR

me revoici avec encore un problème de PCR. J'ai préparé des plaques PCR 384 d'ADNc avec un témoin négatif d'eau RNAse free présent dans 96 puits répartis régulièrement sur toute la plaque. J'ai passé ces plaques en PCR à raison d'une tous les 2 jours. J'ai ensuite lancé ma PCR sur le light cycler 480 de ROCHE.  [...] - toujours dans les puits de témoin négatif, généralement, je n'ai pas de Tm sauf pour certains échantillons qui ont un Tm légèrement inférieur à celui indiqué pour les ADNc.   [...]

[Biologie Moléculaire] Etapes de mise au point qPCR - gène peu exprimé

J'ai passé en qPCR tous mes couples d'amorces parallèlement à mes 2 gènes housekeeping préférés, sur des ADNc de cellules qui surexpriment mon gène en faisant des gamme de dilution de mes ADNc de 10-1 à 10-5. Grosse déception, seuls 2 couples sur les 6 designés ont eu une courbe de fusion acceptable, et une efficacité correcte.   [...] Concernant l'extraction d'ARN, je ne pense pas qu'il y ait de souci puisque j'ai fait migrer mes ARN dans une puce de bioanalyzer Agilent 2100 et ils sont nickels. J'ai utilisé de l'eau RNase free.  [...]

[Génétique] Transcription inverse

Génial, merci beaucoup pour toutes vos réponses, je commence à comprendre quelques truc mais j'ai encore un petit problème. Dans mon mélange je met à la fois du DTT qui stabilise les RNases (vous m'avez dit) et des RNases OUT qui qui détruisent ces ARN, je ne comprend donc pas l'utilité de les stabliser si on n'en veut pas.   [...] De plus les ARN sur lesquels on travaille ont déjà été traité avec une DNase dite RNase free (une DNase sans RNase) alors pourquoi on doit encore rajouter une RNase OUT parce qu'on aurait pu contaminer la solution pendant la manip avec des RNases qui trainent un peu partout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation et conservation d'ARN

L'eau RNase free pour préparer l'acétate est précieuse et si je commence à douter de la poudre utilisée par des collegues sans gants + pH mètre + HCl pour ajuster le PH à 5,2 j'ai peur de contaminer mon ARN (sachant que l'autoclave ne détruit pas toutes les RNases).  [...] Ma question est donc. vaut-il mieux préparer de l'acétate de sodium avec de l'eau RNase free et ne pas ajuster le pH (au moins pas besoin d'un gros volume necessaire pour immerger la sonde mais le PH est supérieur à 7) ou vaut-il mieux preparer l'acétate avec de l'eau PPi et ajuster le pH puis autoclaver le tout Quelle est la solution la moins pire.  [...]