• Santé - Dosage, Protéines, Western

Production de Protéines recombinantes

Je tente de produire 2 protéines recombinantes en intégrant plusieurs copies des gènes codant les dites protéines.  [...] Je suis capable de détecter ces copies surnuméraires en QPCR, les protéines par western-blot mais aucune trace quand je tente un dosage par Elisa.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

Je suis d'accord avec Vinc, mais si je me trompe il est impossible de doser ces protéines dans le laemlli... Alors si on veut faire un dépot avec une quantité précise, je préconiserai le RIPA-N, puis un dosage protéique, et enfin la reprise du volume nécessaire de protéines avec un volume équivalent de laemlli 2X.  [...] Oui le dosage dans le Laemli n'est pas possible en effet, mais il n'est pas forcément necessaire de doser les protéines. L'expérience du manipulateur ainsi qu'un contrôle adapté en western permettent d'obtenir un résultat impeccable (je ne fais que des western et j'ai arrêté de doser mes protéines assez rapidement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Biochimie: méthode de Western Blot

Quand je fait une recherche sur internet à propos de la méthode de Western Blot qui sert à identifier et détecter des protéines je trouve qu'il faut réaliser un dosage avec la méthode de Biuret avant la manipulation. Je ne comprend pas pourquoi réaliser ce dosage vu qu'il sert seulement à connaitre la concentration en protéine d'une solution.  [...] En fait, doser les protéines avant un Western blot permet de déposer la même quantité de protéines dans chaque et pour chaque échantillon.  [...]

[Biotechnologie] comparaison gel d'acrylamide et de focalisation

Dans le cadre de dosage de protéines, j'aimerai comprendre la différence entre ces deux gels. si j'ai bien compris le gel d'acrylamide sera un gel normal avec le quel on peut faire un western blot par exemple. Tandis qu'un gel de focalisation va permettre une séparation par rapport au point isoéléctrique des protéines.  [...] Finalement on observe la même chose sur ces gels. la quantité de protéines.  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Pensez vous qu'il soit nécessaire de réaliser un dosage des protéines afin de déposer précisement la mm quantité de protéines.  [...] Il est toujours mieux de réaliser un dosage de protéines avant un western blot, cela permet d'être bien sûr de ce qu'on dépose.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je cherche le moyen d'optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire. Je travaille sur FAS (274kDa) et je n'arrive pas à la transférer.  [...] Mais pour mes protéines, je n ai aucune bande supérieure à 200kda. Evidement après incubation avec mon AC, je n ai pu rien révéler. Cependant, la b actine est tres bien révélée (beaucoup même, car j ai dû loader une quantité très élevée de protéines). Donc, je pense que.  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Puis pour verifier la purete je ferais sur un gel d un cote une coloration au bleu de coomassie qui va colorer toute tes proteines et de l'autre un western blot avec des anticorps diriges contre la proteine que tu veux.. puis tu compare les 2 gels.  [...] Comparer un gel au bleu de Coomacie avec un western me parait être une bonne idée mais est-on sur que dans l'extrait protéique il n'y aura que la protéine que l'on veut étudier Si on utilise un anticorps contre notre protéine d'intérêt on ne verra qu'elle mais cela ne veux pas dire qu'il n'y a pas d'autres protéines que l'on ne voit pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Régulation de NFAT5

Donc l'idée est de faire une immunoprécipitation des protéines ubiquitinilées. Puis un western anti ubiquitine permet de voir l'ensemble des protéines précipitées. Ensuite, sur le même extrait on fait un western anti NFAT5 afin de savoir si il fait partie des protéines précipitées.  [...] La panneau input correspond à l'extrait protéique qui ne c'est pas fixé sur les billes (non immunoprécipité). C'est un contrôle qui permet de s'assurer que les protéines sont quand même présentes dans l'extrait au départ. Si on ne le fait pas on est jamais certain que NFAT5 est présent dans l'extrait initial et du coup un résultat négatif pourrait simplement correspondre à une absence de protéine.  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] Je fais également des western blot et j'ai le même problème que toi. je resuspend mes protéines directement dans le tampon de charge donc je ne peux pas quantifier la quantité de protéines que je dépose sur gel.  [...]

delai depistage vih

Mais bon si le test WB des protéines virales HIV est négatif ( si il a bien été fait ) normalement ça c'est fiable, m'enfin retourne comme dit, voir des gens qui seront à même de te dire si oui ou non c'est négatif.  [...] Il aurait fallu qu'elle fasse un test hiv à 6 semaines de sa dernière prise de risque afin d'être sûr qu'elle est séronégative et ainsi continuer à avoir des relations non protégées avec (même si je suis avec le fait de rester protégé...).   [...]