• Santé - Dosage, Protéines, échantillons

[Biochimie] Extraction et dosage des protéines

Je suis obligée de beaucoup diluer pour éviter ce dosage parasitesui de plus et inégal selon mes échantillons. En fait quand je colore au bleu de coomassie un gel contenant mes protéines après électrophorèse, je m'aperçois que je ne retombe pas sur mon dosage (certains profils protéiques sont plus intenses alors que moins concentrés que d'autres lors du dosage).  [...] En fait, lors de la lyse de mon tissu avec le Ripa, j'extrait en même temps que mes protéines tissulaires, des cellules sanguines qui n'avaient pas été éliminées lors de mon lavage de tissu lors du prélèvement. Je crois que je n'ai plus qu'à diluer au maximum même si je suis dans la limite du dosage. merci en tout cas.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel 1D

pourtant après dosage la quantité de protéines semble suffisante j'ai par exemple 1.6µg/µl je ramène tout les échantillons à cette concentration, j'ai engagé une plus grande quantité de protéine 65µg. j'ai vérifié les pH des tampon tris pour les deux gels (concentration et séparation) je travaille avec la même source.  [...] je laisse migré à 12 mA constant toute la nuit (voltage max et puissance max), et quand je lance deux gels je mets à 24 mA et pareil le reste au max.   [...]

[Génétique] Western blot

Je fais 2 gel en même temps donc je dépose 20µl du même échantillon dans deux puit, un de chaque gel ) et bien évidemment le dosage protéique à bien été effectué et les calculs ont bien été effectués, comme je l'ai dit plus haut, je dépose 30µg donc je divise 30 par la valeur obtenue suite au dosage de l'échantillon protéique.  [...] Le dosage protéique a été effectué correctement. Je dois soumettre mes échantillons a différentes conditions (avec et sans inhibiteur) pour voir l'abondance d'expression des mes protéines selon la condition adéquate, donc il est impératif que la tubuline soit intacte pour tout mes puits pour que je puisse quantifier.  [...]

[Biochimie] électrophorèse

en tout cas, le problème ne vient pas du gel puisque les échantillons que j'ai déposés dans les autres puits ont tous migrés correctement. il ne vient non plus d'une contamination par protéase puisque les autres échantillons qui ont migrés correctement provenait du même mélange (c'est en fait des lavages provenant d'une même colonne chromatographique).  [...] Question bête mais bon. concernant votre échantillon. êtes-vous sûr qu'il y avait des protéines Avez-vous fait un dosage Peut être que l'élution sur la colonne chromatographique n'a rien donnée.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS page

Qu'est-ce que tu déposes comme échantillon sur tes gels. protéine recombinante (j'en doute), extrait cellulaire Avec quoi tu colores. bleu de Coomassie, Simply Blue,... Ce que tu appelles bandes verticales, ce ne serait pas plutôt des bandes horizontales,... Essayes d'être plus précis.  [...] Je met SDS et urée justement pour ne pas avoir une concentration trop élevée en urée à mettre ce qui pose déjà problème dans mon dosage de protéine que j'effectue avant de déposer mes échantillons, juste après la solubilisation.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

A me sens il est suffisant. qu'on mélange x ml de l'échantillon et x ml du colorant, ils se lient, on regle le sepectro à 995 nm, le melage absorbe le rayon monocromatique. Et si le spectro afiche par exemple A=0,412 ça corespend à 20 micrograme.  [...] idéalement il faut utiliser le même tampon, en effet, puisque certains composés de certains tampons ont une absorbance propre. Après, ça dépend des conditions de mesure, par exemple moi qui mets 1 µL d'échantillon dans 1mL de réactif, je ne me pose pas la question.  [...]

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification

l'huile étant insoluble dans l'eau il m'est impossible de solubiliser le peu de protéines présents, (je tiens à préciser que le dosage est réalisé sur des quantités exprimées en ng de protéines/mg d'échantillon) donc j'ai très peu de matière.  [...] Dans un premier temps j'ai simplement vortexé 100µL d'huile au 1/10 dans une solution tampon pH9.3. les résultats n'était pas concluant après dosage et la solution est devenue légèrement blanchâtre.  [...]

[Biochimie] Dosage de protéines par Bradford

J'ai effectué le dosage de protéine du lait. Pour l'extraction des protéines, j'ai peser 4g de l'échantillon et ajouter 20 mL de méthanol. Après centrifugation le volume extrait de surnageant est de 21 mL avec une absorbance de 0.050 nm. La courbe d'étalonnage du BSA en fonction de l'absorbance est. y= 0.0078x.  [...] Non, je répète. vous aviez 4 g d'échantillon dans vos 21 mL, au final vous avez 6.4 µg protéine BSA dans 100µL qui représente 0,019 g donc.  [...]

[Biochimie] dosage des proteines

pourquoi on resuspendre le cullots de proteines avec du NaOH avant de.  [...] Pensez-vous que cela pose problème de resuspendre le culot de protéines dans de l'acide (sulfosalicilique 1.3%) avant d'effectuer le dosage.  [...]

[Biochimie] NanoDrop

Tu peux lire la DO proteine pareil, il va mesurer 260/280 et 230 ou 330 je sais plus, il a meme des proteines preintegree comme la BSA pour la quantif, sinon tu rentre toi meme ton coef et il te donne la concentration.  [...] donc à priori pas de problème pour doser des protéines à 480nm. Il faut juste paramétrer le soft vu que ça ne doit pas être dans les programmes de dosage classique.  [...]