• Santé - Digestion, Restrictions, Fragment

[Biochimie] Poids plus élévé après digestion enzymatique

tu sais quel est le profil que tu dois obtenir après digestion si c'est un produit PCR c'est linéaire. Tu n'as qu'un fragment apres digestion C'est pas du a une structure de repliement.  [...] C'était une digestion des sites de restrictions d'un fragment que j'avais amplifié par PCR, sur mon gel je ne dois obtenir qu'un seul fragment d'environ 1000bp.  [...]

[Biologie Moléculaire] ligation

Par exemple, lorsque tu fais ta digestion, il est conseillé de faire des témoins négatifs (sans enzymes de restrictions), des témoins positifs (lors d'une double digestion, tu vas faire deux témoins de simple digestion), puis tu vas faire migrer le tout (ton produit de digestion, tes trois témoins) sur des gels d'agarose.  [...] Ajouter un ddNTP aux extrémités avec une terminal transférase (je ne vois que cette activité enzymatique pour effectuer cette modification) conduirait à une impossibilité du vecteur à se recirculariser de façon irréversible. Il restera définitivement linéaire à moins d'ajouter une exonucléase peut-être, mais de toute façon je n'ai jamais entendu parler de l'utilisation de cette méthode pour empêcher un vecteur de se recirculariser, ni de son utilité.   [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

On obtient un gel avec des produits de PCR de colonies bleues et blanches, de plasmides digérés par enzymes de restriction et des plasmides non digérés provenant de colonies bleues et blanches. (= 6 bandes)+marqueur de taille.  [...] Preparation of the insert (End conversion reaction) [/B ]= redpréparation du fragment fait par le prof auparavant...Il a utiliser un commercial PCR clean up kit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Améliorer la spécificité d'amorces

J'ai pensé à séquencer les trois types de bandes et à redéfinir des amorces, mais sachant que mes fragments sont relativements courts (rarement. 300 pb) aurai-je beaucoup de succès.  [...] Avez-vous essayé, puisqu'il semblerait que vous travailliez en séquences connues, d'utiliser des profils de restrictions ou en analyse de fragment.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Pour ce faire nous allons réaliser une PCR du gène Tet avec deux amorces contenant des sites de reconnaissances pour les enzymes de restriction XbaI et HindIII. Visiblement les amplicons obtenus possèdent à chaques extrémités le site de reconnaissance pour ces enzymes de restrictions et une Adénosine (d'ailleurs là j'ai pas compris d'où elle vient).  [...] 3-On introduit les enzymes de restrictions XbaI et HindIII. on va avoir le fragment Tet qu'on va ensuite insérer dans pBCKs+.  [...]

[Biologie Moléculaire] Chromosome painting

Est-ce que quelqu'un sait précisément comment on fait du chromosome painting (désolé, s'il y a un équivalent français, je le connais pas) En particulier, comment faire en sorte de faire des sondes qui s'hybrident sur tout le chromosome, et pas ailleurs Ma petite idée, mais je n'ai pas pu la confirmer par ma recherche, c'est que si on veut faire des sondes spécifiques du chromosome 2 par exemple, on prend un chromosome 2, et on le coupe par des enzymes de restrictions, puis on fixe des fluorochromes à chaque fragment.  [...] Mais je ne sais pas si c'est véritablement réalisable (en particulier, comment prendre le chomosome 2 spécifiquement, pour lui faire subir ce traitement ).   [...]

Enzyme compatible, non compatible

- En rapport avec le plasmide. pourquoi est ce que l'on utilise pas la meme enzyme de restriction dans la bactérie pour créer la meme coupure et ainsi faciliter l'insertion du fragment de restriction Pourquoi en utiliser 2 bien qu'elles soient compatibles.  [...] Parceque malheureusement on ne choisi pas les sites de restrictions présents dans le génome. Du coup il faut faire avec ce que l'on a. En utiliser deux permet d'orienter ton fragment ce qui peut avoir un interet certain. Il peut aussi y avoir une multitude de raisons pratiques mais je pense que c'est en dehors de tes préoccupations.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP: génie génétique et diagnostiques

Sur le point un je pense que ta réflexion est bonne, la RFLP se base sur des profils de restriction, hors si tu est hétérozygote il se peut que le second allele ne possède pas les les même sites de restrictions au sein de sa séquences, d'ou un profils de digestion différents.  [...] C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere.  [...]

Enzymes de restriction

non les enzymes de restrictions coupent l'ADN bactérien, sauf celui de la bactérie qui synthetise naturellement l'enzyme. Cette bactérie peut etre protégée de la digestion soit par méthylation (mais ca ne permet pas de tout expliquer car bcp d'enzymes ne sont pas sensibles a la methylation), soit tout simplement parceque le site n'existe pas dans le génome.  [...] Toutefois, comme rien n'est simple dans la relation hote/parasiste, certains phages codent eux même pour des systèmes restrictions/modifications (RM) afin d'empecher toutes infections secondaires par d'autres phages quand ils ont primo-infecté une bactérie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

OK, que s'est-il passé pour que, avec BamH1, le fragment produit avec ADN2 de 5000 pb environ, se retrouve avec ADN1 à 3000 pb C'est quoi comme type de mutation.  [...] que s'est-il passé pour que, avec BamH1, le fragment produit avec ADN2 de 5000 pb environ, se retrouve avec ADN1 à 3000 pb C'est quoi comme type de mutation il s'agit d'une D...N de...(nombre) de nucléotides.  [...]