• Santé - Detection, Protéines, Membrane

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Un western blot, ou immunoblot, est une méthode de biologie moléculaire qui permet la détection de protéines spécifiques sur une membrane.  [...] détection. le principe consiste à appliquer sur la membrane des anticorps marqués qui sont spécifiques des protéines que l'on veut observer. On pourra ainsi observer leur position sur le gel.  [...]

Nos bactéries nous protègent du diabète de type 1

Des chercheurs français, en collaboration avec des équipes chinoises et suédoises, révèlent comment des bactéries de la flore intestinale jouent un rôle protecteur contre cette maladie auto-immune. Au centre de ce mécanisme. des peptides antimicrobiens, les cathélicidines, qui limitent l'inflammation du pancréas.   [...] Pour lutter contre les pathogènes, le système immunitaire a développé plusieurs mécanismes de détection, de défense mais aussi de destruction des micro-organismes dangereux pour l'organisme. Parmi eux, les peptides antimicrobiens, protéines naturelles, détruisent les bactéries pathogènes en rompant leur membrane cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dot blot

On ne sépare pas les protéines et la détection peut s'en trouver altérée (augmentation du bruit de fond notamment). Il n'y a pas d'électro-transfert et de ce fait la fixation des protéines sur la membrane est plus faible. On ne peut pas observer de shift de migration ou des migrations à des poids moléculaires aberrants et il est donc impossible de visualiser les modifications post-traductionnelles en utilisant un anticorps dirigé contre la forme totale.  [...] Je dis que ce n'est pas aussi rigoureux qu'un western parce que les protéines ne sont pas solidement ancrées dans la membrane et si un jour tu as l'occasion de faire un western et un dot-blot en parallèle hybridés avec le même anticorps tu pourrais avoir des surprises comme cela m'est arrivé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunodétection après production d'une protéine recombinante

Sur la membrane, on visualise la bande correspondant a la prot d interet, qlq detections non specifiques, et aussi une bande assez intense qui apparment serait le lysozyme, retenu de façon aspecifique.  [...] Oui nous avons saturé la membrane, mais je pense que le fait d avoir utilisé un anticorps contre le tag et non contre la proteine explique en partie la detection d autres prot.  [...]

Interaction entrée viral protéine cellulaire

Quitte a synthetiser une proteine recombinante autant faire un pull-down avec une fusion GST-proteine X. Si tu utilises une etape anticorps, ne pas oublier de cross-linker l'anticorps avant l'IP... Un autre detail, identifier des proteines membranaires par mass spec n'est pas une partie de plaisir.  [...] .. des techniques specifiques sont requises puisque les proteines membranaires ont une facheuse tendance a ne pas se solubiliser facilement et a avoir un caractere hydrophobe. Enfin, l'etape 2D n'est pas forcement indispensable, tout depend de la technique de detection derriere.  [...]

[Biochimie] Détection des proteines d'une solution acqueuse.

Je dois élaborer un test afin de détecter et quantifier la présence de proteines et d'acide aminés libres dans une solution acqueuse.  [...] c'est le bleu de coomassie, un colorant, qui absorbe à 595nm lors de sa complexation avec les protéines (residus aromatiques et hydrophobes je crois).  [...]

[Biochimie] Purification de la beta-gal

(je copie colle ce que j'ai écris dans mon compte rendu et on dispose d'un extrait bactérien qui a subit lyse membranaire et dialyse donc dans l'extrait on a que des protéines).  [...] On utilise du bleu de Coomassie (réactif de Bradford  RB) qui se colore en bleu lorsqu'il est lié aux protéines. On dépose 200 µL de RB (préalablement dilué au 1/5 dans de l'eau distillée) dans chaque puits et on y ajoute 20 µL d'une fraction dans l'ordre de sortie de la colonne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

Dans le cas d'un western blot, c'est +/- le même principe détection à l'aide de deux anticorps sauf qu'on agit sur une membrane. Après avoir fait migrer ta protéine sur une membrane, tu la détectes à l'aide d'anticorps primaire et secondaire. Cependant cette technique est bien plus fastidieuse.  [...] Donc la proteine reconnu ne peut être qu'un antigene non Parce que dans les (quelques) recherches que j'ai fait sur l'immunohistochimie on parle de detection de proteines sans préciser le type.  [...]

Détection de protéines mal repliées par western blot?

Si ce n'est que pour une protéine, cela doit être possible de voir un changement de taille de la protéine en condition non dénaturante. Une protéine mal replié étant généralement plus grande que celle bien replié, elle migrera moins vite. Mais l'insuline est vraiment petit en taille, et je ne sais pas s'il est possible de voir clairement un tel changement de conformation.  [...] Si votre objectif est ensuite de regarder toute les protéines (donc le protéome), le DIGE -2D (2 dimensional difference gel electrophoresis) est probablement la technique la plus adapté (toujours en condition non dénaturante).  [...]

Transcription or not transcription

Les tetracyclines et macrolides sont des ATB qui inhibent la synthese peptidique. Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non.  [...] Si tu as un problème à détecter les ARN, ca vient peut être de la détection en elle même. En passant par une détection des protéines (électrophorèse 2D), tu pourrais voir si il y a un changement au niveau de le synthèse des protéines. Ca ne t'aide peut être pas directement pour ta technique, mais ca peut permettre de vérifier si c'est un problème de méthode ou de principe.  [...]