• Santé - Dépôt, Volume, Protéines

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

En ce qui concerne le volumen de lyse, je ne travaille pas en flasque, mais je lyse une boite de 6cm avec environ 1 à 2 millions de cellules, et ensuite je charge environ 15 à 25 µL ce qui correspond à 30000 ou 50000 cellules par puit. Mais après tout dépend de la protéine que vous voulez détecter.  [...] Je suis d'accord avec Vinc, mais si je me trompe il est impossible de doser ces protéines dans le laemlli... Alors si on veut faire un dépot avec une quantité précise, je préconiserai le RIPA-N, puis un dosage protéique, et enfin la reprise du volume nécessaire de protéines avec un volume équivalent de laemlli 2X.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

Ok, donc si vous êtes sûr que votre protéine d'intéret est bien produite. Les smears sont en géneral dûs á une mauvaise préparation d'un des deux gels (ou des deux) ou encore au dépot d'un volume trop grop de protéines dans les puits du gel.  [...] Si toute fois elle a toujours le même smear après dépôt d'un plus petit volume de protéine éluée et préparation d'un nouveau gel, elle trouvera peut etre la réponse ici (c'est en anglais).  [...]

[Biologie Moléculaire] bleu de Laemmli... jaune

Regarde le wikipedia sur le bleu de bromophenol, il est jaune sous forme acide et vert sous forme basique. Si ton tampon n'est pas au bon pH, cela peut avoir des conséquences sur les protéines.  [...] Le tampon n'est pas au bon pH ou le processus d'extraction rend des protéines à un pH acide. Ça m'était arrivé quand j'en purifiais. Le bleu redevient bleu dans le gel parce que lui peut tamponner le faible volume de dépôt. Au pire vous ajoutez une goutte de tris 1M pH 9.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

un pour la protéine d'intérêt, un pour le témoin de dépôt (actine dans ton cas). Bien entendu, cela n'est pas optimal pour la normalisation par le témoin de dépôt, mais si le dépôt est bien homogène entre les deux gels et que le volume est déposé avec précision, c'est valable.  [...] Personnellement, je suis dans le même cas que toi au niveau de la taille des protéines, je coupe juste en-dessous des 50 kDa. Pour rester droit, je dépose du marqueur sur les deux côtés de mon gel ce qui me permet d'avoir deux points de repère pour couper.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Mais ca n'a absolument rien à voir avec l'automatisation. Si l'ensemencement des cellules est bien fait il n'y aura aucune différence en western point final. C'est la multiplication des étapes qui introduit des erreurs. Lorsque tu fais une manipe dans laquelle les cellules ne prolifèrent pas à la même vitesse, ou lorsque la quantité de protéine est rédibitoire car pouvant entrainer des saturation etc.  [...] S'il veut être dans une quantité de protéines raisonnable pour le dépot, il faut qu'il dose au moins une fois pour connaître la quantité moyenne qu'il récupère. Dans le tampon laemmli, comme tu l'as dit, on ne peut pas doser à cause du bleu (et encore, même sans bleu.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS-page

Perso, j'ai besoin de savoir à quoi tout ca sert parceque j'ai bientot un examen et que mon expert peut me poser ce genre de question et j'aimerai bien savoir lui répondre, ca serait bien. Je connais tout les composants (sauf du gel), mais j'aimerai savoir à quoi ca sert.   [...] B bromophénol. colorant utilisé pour suivre le dépot et la migration des protéines.  [...]

Encrassement protéique

J'ai vu que l'encrassement est composé de 2 types de matières*. les protéines dénaturées et le dépôt minéral. Au cours du chauffage du lait supérieur à 90°C, la ² lactoglobuline vient s'associer avec la kappa caséine des micelles. Le complexe kappa caséine-² lactoglobuline se sépare de la micelle et entraîne une coagulation du lait par déstructuration de la micelle de caséine.  [...] Au cours du chauffage, les protéines du lait vont venir s'intégrer sur les micelles en entraînant une diminution du taux des protéines solubles, une augmentation de la taille des micelles et une augmentation de viscosité. Ce comportement est important dans les échangeurs thermiques à plaques puisque cela se traduit par un phénomène d'encrassage de ces derniers (dépôt de micelles à la surface, augmentation de la viscosité, diminution des débits).  [...]

[Biochimie] goutte epaisse

- Dépôt du sang. déposer, sur une lame de verre dégraissée, une grosse goutte de sang (2 fois le volume utilisé pour un frottis).  [...] - Défibrination. en cas de prélèvement capillaire, pour empêcher la coagulation, avec le coin d'une autre lame ou la pointe d'un vaccinostyle, étaler régulièrement le sang sur une surface de 1 cm de diamètre, en tournant régulièrement pendant 2 minutes.   [...]

[Biologie Moléculaire] Exercice sur l'éléctrophorèse

Alors déjà, vu que tes 2 protéines ont migré, on peut en conclure qu'elles sont toutes les 2 chargées au pH utilisé, et que donc que le pH n'est pas égal à 6 ni à 5,3 (différent du pHi quoi, sinon il y aurait une des protéines encore sur la ligne de dépôt).  [...] Merci à vous deux de vos réponse, merci Zellus je pense avoir compris donc voilà le scan de l'électrophorèse j'ai rajouter les pôles dessus est-ce que c'est bon.   [...]

Alzheimer : bientôt un traitement par photothérapie dynamique ?

Du point de vue anatomique, la maladie d'Alzheimer se caractérise par la formation et le dépôt de protéines bêta-amyloïdes dans le cerveau du patient. Ces protéines anormalement repliées endommagent les cellules du cerveau, conduisant à la détérioration des fonctions cérébrales et à une démence.  [...] Les porphyrines ( photosensitized TPPS, pour meso-tetra(4-sulfonatophenyl) porphyrine) stimulées par la lumière bleue ( Blue LED light ) inhibent l'assemblage des protéines amyloïdes ( self-assembly ). KAIST.  [...]