• Santé - Dégradation, ARN, Méthode

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

Je me suis trompé d'image. Voici l'image de la migration des échantillons pour les 2 méthodes Mon coéquipier et moi avons fait les mêmes méthodes donc on a 2 échantillons de chaque méthode. Toutefois, dans les échantillons extrait par colonne sont plus dégradés ce que j'arrive pas à comprendre.  [...] Pour les deuxméthodes ont a utilisé des centrifugations à 13 000 rpm, surtout dans la méthode par colonne.Donc, est-ce que le nombre de centrifugations aurait un impact dans la dégradation de l'ARN puisque c'est dans la méthode par colonne où c'est plus visible et c'est dans ce méthode qu'on trouve le plus de dégradation.  [...]

[Biotechnologie] Comment déterminer le rendement d'une RT?

La seule methode pour determiner un rendement de RT est de rajouter un ARN de synthese pur et de quantitee connue. Si tu sais combien tu met de cet ARN au depart, tu va le traiter comme les autres lors de la RT et lors de ta PCR tu va quantifier ton ADNc provenant de cet ARN en meme temps que tes echantillons.  [...] En effet, la méthode avec l'ARN de synthèse a l'air un peu plus dur à mettre en oeuvre mais j'ai peur qu'avec le dosage des acide nucléique, on mesure en même temps les nucléotides libres issues de la dégradation de l'ARN alors c'est peut-être bien la première la plus juste.  [...]

Contrôle Qualité ARN

Le RIN est un nombre qui est généré à partir d'une distribution, qui est la quantité d'ARN en fonction du temps qui est détectée sur ton gel. Cette distribution (ou profil) est utilisée pour quantitfier la dégradation de l'ARN. Avant, les ratios 28S/18S d'ARNr étaient utilisés, parfois d'autres méthodes.  [...] Afin de normaliser la quantification de la dégradation de l'ARN, le RIN a été développé. Il se calcule grâce à un algorithme, qui prend comme entrée la distribution et qui en ressort un nombre entre 1 et 10. Ce nombre sera grand si l'ARN est peu dégradé.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

En bref,, il s'agit d'analyser l'ARN ribosomique afin de s'informer sur lintégrité de l'ARN messager (l'ARNr étant plus fragile que l'ARNm chez les eucaryotes). Savez-vous pourquoi on peut supposer cette hypothèse chez les eucaryotes mais pas chez les procaryotes Concernant la dégradation.  [...] Savez-vous pourquoi on peut supposer cette hypothèse chez les eucaryotes mais pas chez les procaryotes Concernant la dégradation... quelles en sont les effets (enfin, la dégradation, est-ce l'ARN qui est dégradé par les RNases ou est-ce du à la chaleur, un stress physique ou autre ).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

La DO de mes ARN me donne une forte absorbance à 230 et légère à 270. est-ce le signe d'une forte une dégradation des ARN à 230 et d'une contamination au phénol à 270.  [...] En déposant 1 µg d'ARN en gel 1,2 % TAE (autoclavé bien que certaines RNases soient resistantes mais je n'ai pas de DEPC) sur une cuve décontaminée à la soude puis au SDS puis à de l'eau autoclavée. j'obtient des bandes 28S et 18S correctes et parfois un smear de dégradation pour les prélèvements vieillis exprès.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

oui je fais les deux aussi, j'ai pas non plus des superbe ARN, on voit qu'il y a un peu de dégradation, mais pas énorme non plus. j'ai le kit RNAseOUT recombinant Ribonuclease Inhibitor de chez invitrogen, mais aucune concentratio d'utilisation n'est indiquée, et les publication de reference sur le site d'invitrogen indique des mode d'utilisation completement différents.  [...] si les ARN sont susceptibles de dégradation, ce que je fais c'est mettre 1µl de RNAsin dans un tube vide, puis d'éluer les ARN de ma colonne dans ce tube. Bien agiter.  [...]

[Biologie Moléculaire] stabilité ADN

Hmmm il me semble, pour répondre à une de tes questions que l'ARN peut s'apparier sous forme de double brin..malheureusement les exemples qui me viennent à l'esprit dans l'immédiat sont particuliers. Par exemple les ARN interférants sont des ARN qui vont s'apparier dans certains cas à d'autres ARN pour provoquer leur dégradation ou empêcher leur traduction.  [...] On a aussi l'exemple des séquences CRISPR chez certaines bactéries qui s'hybrident aussi avec des ARN(viraux) pour entrainer leur dégradation.  [...]

ARN double-brins

Le principe est d'exprimer un petit ARN complementaire a une portion d'un ARNm. Apres ce petit ARN va s'apparier avec la region de l'ARNm concernee. La il y a deux cas de figures. Le complexe d'ARN double brin est pris en charge par un complexe enzymatique qui va provoquer la degradation complete de l'ARNm.  [...] Soit une extinction transcriptionnelle du gene liee a une boucle genre feedback negatif, soit apr saturation du systeme, alors l'ARNm echape a la degradation et les petits arn ne sont plus produit donc disparaissent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Devenir atomique dans le cycle de vie des cellules

Après, une certaine partie des nucléotides et des acides aminés issu de la dégradation des ARN et des protéines sont dégradés ce qui permet un certain renouvellement. Peut être 1% des nucléotide ou AA à chaque cycle de fabrication/dégradation des protéines ou ARN sont dégradé et se retrouve dans les urines.  [...] Dans une cellule l'ADN ne change pas, ni le code ni les atomes. l'ADN est créé avant un division cellulaire et détruit à la mort de la cellule. Les atomes des nucléotides qui se retrouvent en déchet dans les urines sont issus de la dégradation des ARN ou de l'ADN des cellules mortes.  [...]

Définition | Exosome | Futura Santé

Un exosome est une machinerie cellulaire capable de dégrader l' ARN.  [...] L'exosome a pour fonction de dégrader les molécules d'ARN, de grande (ARN messager) ou de petite taille (ARN ribosomique...), dans le but d'éliminer ceux qui ne sont pas corrects. La dégradation se fait progressivement par l'extrémité (appelée 3') de l'ARN.  [...]