• Santé - Décongélation, ADN, Stock

congelation décongélation ADN

J'espere que je serai utile de part ma specialité de microbiologie. Je voudrais que l'on me rassure et ou du moins on m'informe. si la congélation décongélation de _20°C et _4°C de l'ADN stock work (diluée à la concentration de travail) est néfaste et altere l'ADN.  [...] C'est la répétition de ces cycles de congélation décongélation qui est néfaste. Lors de la congélation, il y a formation de cristaux qui peuvent endommager l'ADN. Plus tu crées de cristaux dans ton tube, plus tu as de risques d'endommager gravement ton ADN.  [...]

RT qPCR

Les enzymes se gardent à -20 dans leur solution stock, mais en réalité les protéines n'apprécient pas trop la congélation/décongélation et elles peuvent perdre leur activité enzymatique,  [...] Ce que Flying voulait dire, c'est que si vous avez mis l'enzyme, dans votre mix et que votre tube est retourné à -20, le glycerol est devenu minoritaire dans votre solution et votre enzyme dans l'eau ne va pas apprécier la congélation.   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative en temps réel

Les cellules au -80°C, c'est ce qu'il faut pour conserver dans de bonnes conditions. Pour les ADNc, au -20 ca peut aller, mais a condition qu'ils soient concentrés. Je m'explique. Bien souvent, pour la qPCR on fait une dilution au 1/10 des cDNA, et on décongèle le tube quand on veut faire une qPCR.  [...] se conserve moins bien que le stock concentré (ce qui est vrai pour bcp de composés biologiques). En outre, répéter des cycles de congélation/décongélation se révèle particulièrement négatif sur les qPCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] QPCR, courbe Tm?

Si ces primers sont connus pour etre bons, (teste par ton labo avec courbe de fusion a l'appuis ou publie et sans moyen de regarder les courbes), alors c'est soit quelque chose qui a change dans ta manip (origine du mix annealing concentration des primers etc) et si ce n'est pas le cas, c'est que soit tes primers sont devenus mauvais avec le temp (ou contamine par quelque chose) soit que ton ARN/cDNA est different et qu'il requiert une optimisation (genre quantite d'ARN plus faible, du coup moins de cDNA, du coup les primers sénnuient et se dimerisent ).   [...] Sinon il faut éviter les congélation/décongélation trop fréquentes des primers, cela influe beaucoup sur le résultat de qPCR. L'idéal dans ton cas serait de refaire la dilution de primer à partir du stock si celui ci est récent, sinon de recommander des primers.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR de clones

Congèles-tu tes ADN contrôles Parce que les cycles de congélation, décongélations ne sont pas ce qu'il y a de mieux pour l'ADN.  [...] Oui c'est vrai. J'y ai bien pensé mais les ADN des lignées subissent exactement les mêmes traitements que mes clones, autant de cycle de congélation décongélation. De plus j'effectue une dilution de mes clones. Ma solution mère ne subit que de très rare congél décongel.  [...]

[Biochimie] La PCR et ses petis bugs

Si tu as changé les produits de pcr il se peut que cela vienne de ton ADN... L'extraction est peut être foireuse. Si tu travaille sur le mémé adn depuis le début il s'est peut etre dégradé (reste de dnase, congélation décongélation...).  [...] Pour la congélation/décongelation, on a effectivement eu un problème de congélateur, mais on a changer et le nouveau lot d'amorce et d'enzyme a été mis dans le nouveau congel, de plus on fait des aliquots pour eviter de sortir trop de fois les tubes.  [...]

[Microbiologie] extraction d'enzyemes!

Je veux savoir qu'elle est la meilleure technique pour l'extraction d'enzymes d'une cellule bactérienne (sonication, lysozyme, congélation/décongélation ).  [...] Le probleme de la sonication c'est que c'est long et parfois denaturant, le lysozyme c'est bien mais l'ADN n'est pas casse, et ce n'est pas trop adapte pour les gros volumes (meme chose pour congelation/decongelation).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contamination non identifiée

Un point important. il faut environ en moyenne 3 jours (assez variable) après décongélation avant que n'apparaissent dans une culture ces cercles marrons et des bactéries, sensiblement en même temps. Avant cela tout est normal, le milieu est même changé deux fois de suite le lendemain de la décongélation.  [...] Elles ne sont pour le moment pas contaminées. Après avoir discuté avec plusieurs personnes faisant de la culture cellulaire on pense que cela pourrait être des champignons... si c'est le cas reste à savoir d'où ils viennent, est ce qu'ils sont présents dans les cryotubes avant la décongélation (problème lors du freezing, problème lors du stockage à -144°C.  [...]

Recongelation

Non elles ne peuvent pas se multiplier pendant la congélation, c'est seulement après, au moment de la redécongélation qu'elles peuvent se multiplier (d'autant plus rapidement que la redecongélation altère l'aliment d'après ce que j'ai lu). Mais bon dans ces conditions, je trouve surprenant qu'en quelques heures l'aliment devienne toxique.  [...] - il me semble aussi que, en théorie, certains modes de cuisson (stérilisation, etc) sont particulièrement bactéricides, donc on pourrait conclure effectivement qu'un aliment peut être consommé quel que soit le nombre de congélation-décongélation subies, pourvu que le mode de cuisson, en fin de processus, soit adapté.  [...]

Préservatif craqué ??

POur en revenir au préservatif, aucune des bactéries citées ci-dessus (voir meme aucune du tout) n'est capable de se multiplier activement sur un préservatif ouvert...donc le préservatif ouvert a moins d'etre trempé dans un poisson en cours de décongélation a toutes les chances d'etre plus propres que les mains qui parfois sont bien plus baladeuses qu'on ne le dit.  [...] En ce qui concerne les produits congelés, aucun aliment n'est totalement stériile même après un grand lavage. le problème vient du fait qu'on part avant congélation d'un taux de bactéries = x et que lors de la décongélation avec les nutriments dont elles disposent, au bout de quelques heures on aura un taux de x n.  [...]