• Santé - Coupe, Fragments, Plasmide

plasmide et BAMH1

Il suffit maintenant de se rappeler que le plasmide est circulaire. Tu as un cercle (et pas une droite sinon ça fait 4 fragments) que tu coupes 3 fois =. tu obtiens trois fragments. un issu à 100% du gène inséré et les deux autres qui contiennent un bout du plasmide et un bout du gène inséré.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.  [...]

Problème de digestion enzymatique

j'ai voulu digérer quelques plasmides afin de confirmer s'ils sont recombinants ou non, 6 plasmides parmi 7 ont été digéré sauf un.  [...] 6- Votre gel est-il assez discriminant pour les tailles de fragments recherchés l'agent intercallant est-il adapté (Gelred vs BET ) ça se trouve vous avez coupé le plasmide, mais ne le voyez pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzyme de restriction

Alors j'ai un plasmide qui fait 5858 paires de base et on nous dit que l'enzyme de restriction EcoR1 coupe a 1,a 948 et a 1582.On me demande de calculer la taille des fragments obtenus apres digestion du plasmide par EcoR1.Je me demande s'il faut soustraire a chaque fois du nombre total de paires de base du plasmide,le nombre de paires de base que coupe EcoR1Sachant que j'obtiens 3 fragments pour ce plasmide si je ne me trompe pas.  [...] L'idée est que tous les fragments ne sont pas nécessairement coupés. Par exemple si le site en position 1 n'est pas coupé alors vous aurez la configuration que je décrivais dans mon précédent message.  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

On obtient 4 fragments, on désire obtenir un fragment de 704 pb (la moitié 5' du gène), qu'on liera sur un autre plasmide pSK lui aussi coupé par ces deux enzymes (pour avoir les bonnes extrémités). Ce plasmide pCR fait 5484 pb.  [...] Je crois, la concentration initiale de l'ADN plasmique initiale EST juste la concentration initiale du fragment digéré dont tu as besoin, parce que pour un plasmide, il n'existe qu'UN fragment de 784 bp qui est celui que tu cherches (la moitié 5' du gène, oui ).  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

La somme des tailles des fragments obtenus doit donner la taille du plasmide initial. Si ce n'est pas le cas, il faut penser à des sites qui donnent des fragments différents mais de même taille. Par exemple, si tu obtiens 1 seul fragment dont la taille est la moitié de la taille du plasmide, ça veut dire que l'enzyme a coupé 2 fois pile-poil au milieu (les sites sont à six heures et midi ).  [...] La 3e digestion qui combine les 2, te permets de le faire. d'après les tailles, c'est le grand fragments de E1 qui est coupé en 2 (50 + 30 = 80), il y a donc 2 possibilité de placer le site E2. soit à 9h, soit à 7h.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

Quel est la différences entre une digestion complète et incomplète, et comment prévoir le nombre de fragments dans le cas d'une digestion incomplète.  [...] Par exemple, pour un plasmide ayant 3 sites de coupures, le nombre de fragments attendu (théorique) est de 6 si l'on considère tout les fragments possible et imaginable. Mais dans le cas d'une digestion incomplète, comment savoir s'il y aura 1 seul site ou 2 site qui seront impliqué dans la digestion du plasmide.  [...]

enzymes de restriction

j'ai deja fait des recherches de mon coté notammen sur wikipédia j'ai trouvé quelques elements de reponse mais pas assez pour faire un exposé apronfondi sur le sujet. et en anglais je suis pas tres forte mais je vai commeme essayé.merci pour ta repose.   [...] créer une molécule de DNA (ex. plasmide) synthétique en recollant ensemble 2 fragments de DNA naturels coupés par une enzyme de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

Je ne comprends pas ce calcul. Je ne vois pas en quoi diviser le nombre de fragments générés (si ou coupe à 100% d'efficacité) avec la probabilité de couper donne quelque chose ressemblant à un rendement.  [...] Arg, je m'a fais eu en comprenant que l'on générait 7000 fragments (ce qui, à vue d'oeil, n'est pas choquant si on coupe toutes les 250 pb) et non pas que les fragments faisaient 7000pb... Shame on me.  [...]

sonde et enzyme de restriction

ca dépend ou s'hybride la sonde, précisément. Si la sonde recouvre tout le fragment et que le site de restriction le coupe en deux, il y a des chances pour que la sonde s'hybride avec chacun des deux fragments. En electrophorèse, vous aurez deux bandes si les deux fragments sont de taille différentes, sinon il n'y aura qu'une bande (mais deux fragments quand même).  [...] Si on coupe au milieu du fragment on a 2 ADN de même taille donc 1 seul bande après electrophorese et la sonde ne s'hybride à rien. Par contre si après l'electrophorese on fait un Southern, là la sonde intervient, elle s'hybride et allume les 2 fragments de même taille (donc 1 seule bande).  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

Le plasmide n1 possède 3 fragments EcoRI comme attendu et de taille. 1200, 1500 et 4700.  [...] dans le cours c'était que le plasmide n1 a été dans le bon sens mais le 2 eme était anti-sens, mais je ne sais pas comment il (prof) definit que c'était sens ou anti sens juste avec les tailles.  [...]