• Santé - Contrôle, Ménage, Exemples

[Biologie Moléculaire] qPCR

J'aurais besoin d'aide je bloque sur l'analyse de résultats de qPCR.   [...] C'est quoi le callibrateur je sais qu'il faut un controle endogéne c'est notre géne de ménage mais je sais pas à quoi correspond le calibrateur si vous avez des exemples se serais super.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

Le Delta et Deltadelta de Ct permet de faire la normalisation. Normalement pour la qPCR il y a une condition contrôle et un gène de référence (de ménage) comme le GAPDH par exemple.  [...] Cela est juste une normalisation, le gène de référence DOIT être le même entre la condition contrôle et la condition expérimentale.  [...]

Besoin d'un éclaircissement (à propos des gènes)

Or, on peut etre gene de menage mais pas gene de structure...exemple. l'ubiquitine, dont l'expression varie peu (d'ou l'utilisation comme controle interne des mainps) mais qui est regulatrice. Certains facteurs de transcription tissu specifiques dont l'expression ne varie que tres peu dans une cellule mais qui regulent l'expression de genes.  [...] Et on peut etre gene de structure sans etre gene de menage...exemple certains filaments intermediares comme la GFAP dans les astrocytes (et eutres cellules gliales). C'est un gene de structure, puisque sa proteine est une proteine cytosquelettique, mais l'expression est tres variable en fonction de l'etat d'activation cellulaire.  [...]

[Génétique] Proposition d'expériences pour travaux futurs

La par contre je n'y crois pas trop. Sur la RT-PCR qui n'est pas quantitative, on arrive a voir de fortes variations d'expression de leur gene de menage. Imagine ce que ca va donner en qPCR quand ils vont tout ramener au gene de menage.  [...] La quantification de relA faite par les auteurs ne prouve en faite pas grand chose car le contrôle interne, hrdB, n'en n'est pas un car représente un gène de ménage ou promoter stringent donc forcément une cible de l'alarmone ppGpp, ce qui fait diminuer l'expression d' hrb après un stress.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comparaison de plaque qPCR

Donc des gènes, dit de ménage, sont utilisés comme contrôle. Ils sont sensés être toujours exprimés de la même manière chez une espèce, quelque soient les conditions.  [...] A chaque fois j'ai mis 8 marqueurs par plaque (les même sur la plaque 1 et sur la 2). J'utilise 1 seul gène de ménage et des échantillons qui servent de références.  [...]

Gène de ménage (gène de référence...)

Alors un gène de ménage est un gène exprimé constitutivement, c'est à dire en permanence comme par exemple l'actine ou la GAPDH. L'expression de ce gène te servira de point de comparaison.  [...] Le Ct(gène d'intérêt) est donc le cycle où commence la phase exponentielle pour ton gène d'intérêt. Le Ct(contrôle) est le cycle où commence la phase exponentielle pour un gène de référence(dans le même tissu.), le fameux gène de ménage dont l'expression ne varie (quasiment) pas.  [...]

Real Time -RT-PCR

Je vais devoir faire des qRT-PCR (PCR quantitative) mais j'avoue que je n'y connais pas grand chose.. Quelqu'un pourrait m'expliquer un peu la méthodologie ou les procdures à suivre dans un ordre expérimental, par exemple dans le meme ordre que cette technique doit etre faite Puis qu'elle est la taille minimale-maximale des sequences à amplifier par cette méthode est ce que des sequences de 200-350 pb sont amplifiables par le qRT PCR.  [...] Choisis bien ton gene de menage des le debut, mieux vaut passer un peu plus de temps a faire de la biblio et a choisir un bon gene de menage plutot que de devoir refaire les mises au point en cours de route. Ton gene de menage doit avoir une expression pas trop differente de celui que tu cherches à quantifier (par exemple, l'ARNr n'est pas genial pour les genes trés faiblement exprimé...).  [...]

Maladie de Crohn et RCH - Page 232

Si on pouvait faire autrement que de vivre sur le dos du contribuable, on le ferait, style tu veux ma maladie je n'ai jamais eu de contact avec la caf, mais s'ils prennent en compte les revenus du ménage je comprends pourquoi bien q u'ils ne connaissent pas nos revenus puisque je ne fais pas de déclaration puisqu'il me reste un seul enfant à ma charge et qu'avec un seul enfant on a droit à rien, ou alors il faut peut-être faire une demande soi même à part.  [...] La contrariété n'a jamais fait bon ménage avec une mici, dur dur de ne pas se contrarier quand un de ses propres enfants va passer des examens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q PCR - méthode de quantification relative

Donc si je comprends bien on compare l' expression du gène recherché avec l' expression du même gène chez un autre individu.   [...] Le gène de ménage est votre témoin. Le problème avec l'ARN est que les quantités récupérées peuvent varier en fonction de beaucoup de paramètres. Pour être sur que le seul paramètre qu'on mesure soit celui de l'expression de ce gène, on le pondère par ce qu'on appelle un gène de ménage autrement dit un gène exprimé tout le temps dans les cellules à des taux constants car indispensables à la cellule pour son bon fonctionnement. L'exemple classique est les ARNr.  [...]

Transcription et traduction des gènes

Voilà ce que j'ai appris il y a quelques années. l'épissage se déroule dans un deuxième temps. (l'ARN transcrit s'appelle le transcrit primaire, la modification des extrémités le transforme en préARNm, puis l'épissage en ARNm). Aujourd'hui ce mécanisme est remis en cause il semblerait que la maturation débute alors que le transcrit est encore en cours de synthèse.   [...] En ce qui concerne la mitochondrie, il n'y a qu'un seul promoteur par brin. Pour l'ADN nucléaire, les locus concernés sont assez complexes et y a pas de règle. Fais une biblio sur le locus GNAS sur le chromosome 20, ça te donnera un exemple.  [...]