• Santé - Concentration, ADN, Fragments

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

Sachant que Rendement = (Concentration après purification) / (concentration avant purification), il me manque donc la concentration avant. On connait la concentration d'ADN (donc celle du plasmide) présente initialement. Cependant, pour connaitre celle des fragments présents (donc l'extrémté 5', après digestion) j'essaye cette formule. (Concentration ADN * (784/5484)). Donc.  [...] Les autres ne sont pas ceux dont tu as besoin. Donc, il n'est pas nécessaire de multiplier la concentration de l'ADN plasmique par le nombre des fragments théoriques (5484/784).  [...]

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger.   [...] Après l'amplification d'un brin matrice par PCR, il y aura des produits PCR, pour un séquençage par la méthode de sanger, ces produits pcr doit être purifiés mais lors de la réaction de sanger, comment on évalue la concentration d'ADN, c'est à dire après la PCR on obtient plusieurs fragments d'ADN alors que par la méthode sanger c'est un seul fragment qui sera séquencer à ma connaissance.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Je ne sais pas ce que tu veux faire avec ton ADN, mais si tu le quantifies A 260 il faut d'abord que tu degrades l'ARN et que tu repurifies l'ADN, sinon ta concentration va etre plus que fausse. Generalement dans les extractions old school il y a une etape de traitement a la RNase avant la precipitation.  [...] C'est inutile de diminuer encore la concentration en agarose dans le gel. Les fragments d'ADN génomique sont simplement trop gros pour être résolus dans un gel d'agarose en électrophorèse classique. Mais ce n'est pas ce que vous souhaitez faire, donc pas de souci à avoir.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Car c'est surement une mauvaise lecture de ma part, mais en te lisant j'ai eu l'impression que tu voulais une gamme pour relier directement a une quantité en ng ou nmol initiale de ton gène, un peu comme en biochimie on prépare une gamme de BSA pour obtenir une concentration de protéines.  [...] relier ton Ct aux Ct d'ADN de concentration connu je ne suis pas sur que cela puisse se faire puisque x ng ou x nmol ne représente pas une quantité de transcrit (selon la taille des fragments), en plus de ca, dans les quantifications, les nucléotides libres sont aussi pris en compte, les primers aussi.  [...]

[Biologie Cellulaire] Reverse transcription et amorçage avec hexamères aléatoires ?

La concentration en amorces aléatoires conditionne la taille des fragments d'ADNc synthétisés. En effet, la longueur moyenne des brins synthétisés est inversement proportionnelle à la concentration en amorces. La concentration d'amorces aléatoires doit donc être déterminée en fonction de la taille du fragment à amplifier.  [...] On peut utiliser des quantités d'hexamères allant de 20 ng (ADNc longs) à plus de 5 µg (ADNc courts) pour une réaction de 20 µL. Il faut noter que de fortes concentrations d'hexamères n'exercent pas d'action inhibitrice sur la RT.  [...]

La PCR fragments d’adn

Tu concentres, et tu fais ta PCR. Il peut être bon de couper l'ADN préalablement par une enzyme de restriction pour avoir des fragments plus courts avant la PCR.  [...] Et si on n'a pas de suspect Si on veut authentifier un individu à partir de traces de salives qu'il a laissées sur la scène de crime Il faut obligatoirement passer par un suspect Si le tueur est fiché au FAEG n'y a t'il pas de moyens techniques qui permettent de dire à partir de la migration des fragments de l'adn Prélevé de la Scène de crime que cela correspond à un tel individu par exemple.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

Il est très possible de cloner un fragment d'ADN génomique amplifié par PCR dans un plasmide extrait mais non amplifié, mais il est préférable de déterminer la concentration approximative disponible de ces 2 olécules avant de les utiliser.  [...] Personnellement je n'ai jamais eut de probleme, mais je passe par une etape de purification sur colone ce qui me permet probablement de m'en debarasser (de la meme maniere que les fragments d'ADN clonés apres migration sur un gel d'agarose+BET. Ceci dit, il en faut vraiment pas bcp, car meme a tres faible concentration ca inhibe tres fort la digestion.  [...]

Demande d'aide pour un exercice

Le critère de séparation des fragments est leurs nombres de paires de base. L'électrophorèse sépare 11 fragments d'ADN. Grâce à des marqueurs de poids moléculaires, on estime leurs longueurs comme variant de 220 à 260 paires de bases. Les différentes bandes ou fragments identifiées sont ensuite découpées dans le gel d' agarose.  [...] Le processus de circularisation d'un fragment d'ADN fait intervenir 2 étapes. l'appariement des brins opposés complémentaires et la réaction de ligation entre les bases. La réaction de ligation étant la même quelque soit la longueur du fragment, il parait peut probable que la ligase soit à l'origine de la différence observée entre les vitesses de circularisation.  [...]

L'ADN révèle le contenu des amphores grecques

Les méthodes d'amplifications des fragments d' ADN permettent aujourd'hui de rendre bavards aussi bien des os que des objets archéologiques. On en a vu un exemple récemment avec l'ADN de l'Homme de Néandertal.  [...] Effectivement, de l'ADN de raisin a bel et bien été trouvé dans 5 des amphores examinées. Mieux, dans 6 d'entre elles, on a aussi trouvé des fragments d'ADN provenant de légumes, de thym, d' origan, de menthe, de gingembre et même de genévrier. Surtout, des traces de ces différents produits ont été retrouvées dans une même amphore.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

Mais que viens faire alors ce gène LacZ je sais qu'en présence de glucose celui-ci va permettre sa dégradation en créant les protéine necessaire... mais je vois vraiment pas son interet ici.   [...] En présence de glucose, les bactéries aillant intégrer le plasmide pUC composé du gène LacZ+ du gène d'intérêt ne vont donner aucune coloration, tandis que celle qui ont intégré un plasmide non recombinant (sans le gène d'intérêt, donc avec un gène LacZ non interrompu) vont faire une coloration bleue.   [...]