• Santé - Composition, Tampon, Lavage, Concentré

[Immunologie] Composition tampon de lavage ELISA

Je suis à la recherche de la composition d'un tampon de lavage concentré 50x.  [...] J'ai essayé à partir de tampon 10x d'augmenter les doses de sels mais la solution sature et surtout à 4°C tous les sels précipitent. J'ai vu des solutions de lavage concentrées 50x assez visqueuse qui ne cristallise pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Tampon de lyse. contient ce qui va lyser la cellule. Il contient souvent des protéases (clivent les protéines des parois) et des détergents (dissolvent les membranes). Cela permet de libérer tout le contenu cellulaire.  [...] Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...]

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Pour être sûr que les différentes isoenzymes soient présentes, un western blot est pratiqué avec l'extrait cellulaire pur (1), le pic correspondant au premier lavage de la colonne (2), celui supposé contenir la protéine kinase C (3) et un dernier avec un lavage fait avec le tampon additionné de chlorure de sodium à la concentration de 2 M (4) (fig.  [...] Les molécules CED-32, CED-33 et CED-39 ne donnent aucune variation significative de la liaison de l'ester de phorbol pour l'enzyme, en effet, avec une concentration de 1.10 -5 M cette liaison s'effectue avec plus de 80% pour les trois composés. Au contraire, le CED-28 est capable d'inhiber le couplage enzyme-ligand quasi totalement (.  [...]

PCR, amorces

plus le GC% est elevé, plus la temperature d'hybridation (Th) est elevée et plus ta PCR est specifique. Avec 20° de Th, tes amorces vont se coller un peu partout sur l'ADN et tu risques d'amplifier n'importe quoi.   [...] Sinon la composition du tampon joue aussi pas mal (concentration en MgCl2, KCl, détergents etc...).  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Le tanpon que tu souhaites utiliser est un tampon d'extraction donc pour moi le plus important c'est qu'il te permettes d'extraite ta protéine avec un rendement maximal et tout en gardant l'activité de ta protréine. La composition que tu as donné me parait classique.  [...] Ensuite concernant ta seconde question. Difficile a répondre sans connaitre ton protocole expérimental (composition tampon, volume tp vs volume extrait enzymatique,...). Peux tu me donner quelques élements de réponses si ce n'ai pas trop confidentiel Mais sache qu'il existe des méthodes pour changer de tampon après ton extraction pour conditionner ta protéine dans un autre tampon... (Dialyse, unité de concentration,...).  [...]

[Biotechnologie] [sels] dans un tampon

Bonjour tout le monde, je possede dans une manip un tampon de lavage pour une chromato d'affinité sur du cobalt, et je saisis pas la forte concentration en sels (1000mM).  [...] Le TCEP est un agent reducteur tout comme le DTT, suivant le pH de tes tampons l'un est preferable a l'autre. Mais les deux sont la pour eviter l'oxidation de tes proteines (notamment des cysteines).  [...]

utilisation du tween 20

Je voulais savoir à quoi servait le Tween 20 qu'on utilise dans la solution contenant l'Ac lorsqu'on fait une immunodétection.   [...] Le tween est un détergent. Dans un tampon d'ELISA ou de western blot, il est très dilué afin d'éliminer les interactions non spécifiques. Certains ne l'utilisent que dans les tampons de lavage, certains dans tous les tampons avec globalement le même résultat final.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...] Vour pourriez peut être tenter également un coloration au nitrate d'argent qui est bien plus sensible que le bleu de Coomassie afin de voir s'il n'y a pas de spot du tout ou si la concentration en protéines est seulement juste un peu faible.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN

Si ca risque de poser un probleme. d'un autre coté, si tu utilises 1ul de ton extrait d'ARN dans 20ul final. Il y a des chances que ton inhibiteur soit suffisament dilué pour ne pas inhiber totalement la RNAseA (d'autant qu'en general tu n'utilises pas des tonnes d'inhibiteur), ca depends des concentrations, mais de toute maniere l'inhibiteur n'est jamais suffisament efficace pour bloquer totalement les RNases.  [...] -tampon d'incubation 1x (0.1M Acetate de Na, 5mM MgSO4 pH5.0). Tu peux aussi utiliser le tampon de RT qui est très proche en composition.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon 10X, 1X???

que signifie un tampon de digestion est ce un tampon ayant le même rôle d'un tampon normal composé de son acide faible et base conjuguée(ou inversement) et permettant la résistance aux changements de concentration des ions H+ ds une solution induits par la digestion.  [...] Pour ce qui est du tampon de digestion il s'agit si je ne me trompe pas du tampon que tu associes avec une enzyme de digestion (par exemple si tu utilises BamHI, tu la mets avec du tampon BamHI) tout comme il existe des tampons ligase... Niveau composition je ne sais pas trop mais ce qui est sûr c'est qu'il remplit bien le rôle d'un tampon normal.  [...]