• Santé - Cellules, Volume, Culture

[Biologie Cellulaire] Culture primaire de monocytes

Il est normal que des cellules issues de sang périphérique meurent pour la plupart dans un milieu de culture. Cela aurait été plus inattendu si les cellules était issu d'une lignée déjà établie en culture. La population cellulaire devrait se stabiliser à un moment donné puis augmenter.  [...] Le volume de la culture. trop grand trop petit... J'ai pas fait de culture primaire des cellules, mais secondaire seulement et pour des cellules immortalisées à des concentration beaucoup moins de ce que tu dis. Du coup, est-ce la concentration de 80 millions de cellules par rapport au volume utilisé est proportionnelle.  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture, viabilité et Entretien de lignées cellulaires.

Pour la viabilité, il te faut faire un prélèvement sur ta pré-culture (décongelé et cultuvé sur ton premier milieu). Ce prélèvement tu vas l'utiliser pour faire des marquages avec des colorants fluorescent qui permettent de discriminer les cellules vivantes et mortes.  [...] Le volume de liquide qui correspond à un carreau est connu (soit dans la doc de la cellule de comptage, sinon tu peux trouver ca sur internet). Du coup tu peux calculer le nombre de cellules vivantes/mortes par millilitre et ainsi déterminer le volume dont tu as besoin pour repiquer ta culture.  [...]

[Biologie Cellulaire] co-culture les cellules vont-elles interagirent??

J'ai pensé après coup à diminuer le volume du milieu de sorte qu'il soit le plus petit possible, à peine recouvrant les cellules pour forcer les transitionnelles à toucher les cellules stromales mais je me dis que pour 3 jours de culture sa sera peut-être limite pour la survie de ces cellules assez fragiles.  [...] Ces molécules existent elles sur les cellules en culture, surtout si on force la liaison en fesant exprimer à l'une d'entre elle un récepteur transgénique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Je recherche un Compteur de cellules automatique

Je suis une jeune tehcnicienne de culture cellulaire (et oui, seulement un an dans le metier, mais quelle année...) à la recherche d'un compteur de cellules (de mammiferes) automatique (et oui notre vieux coulter Z1 d'au moins 15 ans nous à laché...) et je fais un peu tout les fournisseur pour voir le quel serait le meilleur niveau rapport qualité/prix, et je me demandais si il n'y aurait pas qqun qui pourrait me conseilelr à ce niveau, en sachant que j'ai besoin de compter mes cellules pour faire des ensemencement après et que donc j'aimerais qu'il y ait un test de viabilité au bleu trypan inclus, que parfois je travaille sur de petit volume et que donc il me faut un volume de charge pas très elevé.  [...] je peux te conseiller un Compteur de cellules automatique scepter de millipore c'est une machine qui ressemble à une pipette qui vaut 2950 € et qui a des recharges (50 à 140€).  [...]

[Biologie Cellulaire] gros besoin d'aide: toutes mes cellules C2C12 sont mortes!

Ben j'ai pas fait de culture depuis longtemps, et du coup je ne me souvenais plus des volumes, et j'ai trouvé ça là. http.//www.protocol-online.org/forum...showtopic=6418.  [...] Attention pour le lien que tu donnes, je trouve les volumes très importants par rapport à la taille des flasks. Je pense qu'il s'agit là de culture de cellules non adhérente, où les flasks sont cultivés en position verticale et où le volume de milieu est nettement plus important que la culture horizontale de cellules adhérentes.  [...]

surproduction et purification de proteine

_ Les grandes lignes de mon protocole de purif de ma prot (sachant que je congelais mes culots de bactéries transformées de 500 mL de culture, visuellement c'était un peu moins que le volume de l'extrémité conique d'un Falcon 50). un culot + 25 mL de tampon, reprendre doucement, sonication 7 min à 150 V dans la glace pour casser les cellules, centri 30 min 35000 rpm 4°C, surnageant chargé sur colonne Ni-NTA de 2 mL équilibrée avec le tampon.  [...] _ Il faut naturellement que tu regardes ce que tu as dans tes fractions avec des gels colorés mais pour une purif de nouvelle prot faut absolument que tu fasses un Western Blot pour vérifier ce que tu vois et où, avec un anticorps anti His.   [...]

[Biologie Cellulaire] Cellules de Malassey

Vous devez donc préparer des tubes de cellules (volume final compris entre 7 et 10 ml) à concentrations souhaitées en faisant des dilutions en cascade à partir de la culture.  [...] Donc en concentration cela te faire 20 fois moins. Donc il te suffit de préparer un tube de 10 ml 20 fois moins concentré. Pour cela tu prends un volume de ta solution mère 20 fois moins important que 10 ml, c'est à dire 0.5 ml et tu complète à 10 ml. Et voila il te suffit de prendre 2 ml pour réaliser le 1er puits à 100 000 cellules par ml.  [...]

[Microbiologie] microbiologie cellule de Malassez

Le quadrillage est donc constitué de 10 bandes verticales de 0,25 mm de large et de 10 bandes horizontales de 0,20 mm de large formant ainsi 100 rectangles, on ne comptera les cellules que dans 10 rectangles par exemple.  [...] On fait ensuite la somme des cellules observées dans chaque rectangle, on divise ce nombre par 10 (nombre de rectangles comptés), on obtient ainsi le nombre de cellules par rectangle, il suffit de multiplier le nombre obtenu par 100 pour connaître le nombre d'entités cellulaires par mm3.  [...]

[Biologie Moléculaire] transfection lipofectamine LTX and PLUS reagent invitrogene

En effet, avant le dépôt de ta solution de transfection sur tes cellules, enlève le milieu de culture et lave les cellules au PBS (moi je lave deux fois pour être sûr de bien éliminer le sérum présent dans le milieu de culture).  [...] Pour 100µL de milieu de transfection (ADN-lipo-Plus reagent dans de l'opti-MEM), je te conseille d'ensemencer tes cellules la veille dans 1mL de milieu (si tu cultives en plaques 24 puits, à adapter sinon) de manière à ce qu'elles soient à H80% de confluence le lendemain, puis le lendemain pendant l'incubation de tes complexes, de laver ton puits avec du PBS, de remettre 400µL de milieu de culture sans serum puis d'y rajouter tes 100µL de milieu de transfection (limiter le volume pendant la transfection permet de réduire le temps que mettront les liposomes pour sédimenter).  [...]

[Biochimie] milieu de culture de bactéries

Il existe plusieurs milieux de culture et nous ne savons pas lequel est le mieux adapté au développement des bactéries des mains.  [...] Pour ce faire vous pouvez effectuer une première approximation hâtive en effectuant un comptage visuel sur cellule de burker par exemple. Commencer par tremper votre doigt pendant un temps défini dans un faible volume de milieu de culture (eau peptonée par exemple) et estimez la concentration cellulaire.  [...]