• Santé - Cellules, Vecteur, Expression, Protéine

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

J'ai besoin d'aide pour une question dans un exercice portant sur la construction d'un vecteur d'expression pour une proteine recombinante.  [...] On me demande de présenter les caractéristique generales de ce type de vecteur pour permettre son amplification dans le colibacille puis l'expression de notre proteine recombinante dans les cellules de souris.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

* j'ai vu que l'expression chez la levure n'est pas super avantageuse à cause de problèmes de repliements, donc j'ai décidé d'opter pour les baculovirus et les cellules de droso. Mais je ne sais pas ce qui est mieux. ça ou carrément des cellules de Mammifères (je suis dans un labo de microbio ).  [...] Je fais déjà une production cytoplasmique chez coli. Si je mets du KI c'est justement pour éviter au maximum les corps d'inclusion. Outre la structure, il me faut la protéine en forme pour les études fonctionnelles Donc, si je dois choisir entre jongler avec un tas de solutions chimiques qui l'agressent et jongler en bio mol pour la faire produire dans des cellules plus adaptées, je préfère la seconde solution.  [...]

Expression de protéines

J'ai fait une expression de protéine taguée Histidine contenue dans un vecteur d'expression pTrcHis2B (protéine de Plasmodium falciparum ) dans des bactéries d'expression Rosetta 2, seulement lors de l'extraction de cette protéine puis dépôt sur gel j'ai 2 tailles différentes de cette même protéine.  [...] Dans les protéines issues des fractions solubles j'ai une taille plus grande que dans celles des corps d'inclusion (fractions insolubles).  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux. une seule chaîne est produite.  [...] C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine.  [...]

Vaccin VIH

Pourrait t-on réguler l'expression des gènes viraux Je pense notamment à l' ARN interférence, mais reste encore a trouver le vecteur. Est il possible de se servir d'un virus génétiquement modifié qui par exemple ne ciblerait que les cellules déjà infectées (en reconnaissant les protéiens virales à leur surface...).  [...] Le rôle de gp120 est, il me semble, de reconnaitre le CD4 des lymphocytes T, ce qui lui permet de s'internaliser dans ces cellules. Je suppose donc que HIV ne peut pas muter autant qu'il veut cette protéine sinon elle ne peut plus reconnaitre le CD4 qui lui reste stable (enfin le plus qu'il peut ).  [...]

Protéine recombinante, promoteurs du vecteur d'expression

Et même si ce n'est pas toxique, il vaut mieux induire à la fin, on a de meileurs rendements car la pousse n'est pas ralentie à cause d'une protéine surproduite et une meilleure gestion des nutriments.  [...] pour ce qui est de l'induction, il vaut mieux la faire juste avant la phase stationnaire car une fois passé ce cap, les bactéries s'isole de leur environnement en quelque sorte, en diminuant considérablement le nombre de pores membranaires. Donc la molécule inductrice ne peut plus traverser la membrane (peut-être que des molécules hydrophobes pourrait passer par diffusion passive.   [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

les protéines de fusion permettent de neutraliser l'activité d'une cellule en réduisant ses capacités de prolifération, et dans le cas des cellules cancereuses c'est très important et ce qu'on veut avoir.  [...] Merci de votre réponse mais je ne comprend pas très bien. les protéines de fusion limitent la prolifération des cellules toutes les cellules ou uniquement les cellules cancéreuses.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème vecteur d'expression CDC25

Pour cela je dois faire une protéine de fusion, j'ai pensé a la GST mais je cherche comment l'exprimer, j'ai choisi E.coli, est-ce une bonne idée.  [...] Mais je suis bloqué pour l'expression de la protéine, je ne sais pas quel vecteur d'expression, producteur inductible ni enzyme de restriction prendre. J'ai regardé sur clonetech pour le vecteur mais je ne sais pas pourquoi choisir un vecteur et pas l'autre.  [...]

[Génétique] Transfection

je voudrais savoir si les cellules transfectées transitoirement par un vecteur codant la proteine de fusion c-Myc-GFP expriment toujours la proteine c-Myc endogène.  [...] La fusion à la GFP permet juste de suivre t'as prot d'interet (myc). Donc la myc s'exprime mais l'expression ou le suivis (tout depend du but de la fusion) est rapporté par la GFP.  [...]

Ciblage de cellules de mamifères

Je ne parle pas d'insérer un vecteur dans des cellules en culture. je parle de distribuer une protéine particulière à certaines cellules.  [...] En fait c'est possible. Un ami à moi a déposé un brevet sur une technique de transfection de protéines par pseudoparticule virale.  [...]