• Santé - Cellules, Promoteur, Intérêt

Une expérience de transgénèse chez la souris

On injecte dans le noyau des cellules oeufs de souris (mammifères) le gène GFP, quelques cellules oeufs se développent et donnent des souris transgéniques capables d'émettre une fluorescence verte en présence d'ultra violets.  [...] ce qui te permet dans le meilleur des mondes d'avoir des cellules qui expriment la GFP sous le controle du promoteur de ton gène d'interet.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Transfecter un ADNc dans une cellule n'a d'interêt que s'il est équipé d'un promoteur qui permettra d'initier sa re transcription en ARNm, ce qui est rare (si tant est que ça existe).  [...] La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace. On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] Apres avoir extrait mes plasmides (qui contiennent X) je les fais rentrer dans les cellules animales par transfection. et je pense que c'est a ce moment la que le promoteur entre en action.  [...]

Mammalian Expression Vectors

Donc, si t'as la possibilité, essaye peut-être un vecteur avec promoteur inductible, pour ne pas trop destabiliser tes cellules.  [...] Remarque dans le sens de la question de J Luc. Il me semble que la cycline E intervient dans la régulation du cycle cellulaire... Donc l'exprimer (en plus sous le contrôle d'un promoteur fort) est pour moi assez difficile, je pense que les cellules qui vont exprimer cette prot vont être complètement dérégulées, ou il y aura une modification de l'expression de ta prot exogène pour minimiser son effet néfaste et tu ne sélectionneras que des clones qui l'exprimeront peu ou pas du tout.  [...]

[Biologie Cellulaire] Sémiologie- rôle d'un transporteur

Le systeme Cre\Lox est genial pour cibler l'inactivation de genes dans un tissu specifique. Ici ton promoteur de l'insuline est un promoteur qui n'est actif que dans les cellules pancreatique. Tes souris transgeniques ne vont donc exprimer la Cre recombinase uniquement dans ces cellules.  [...] pour la précision. le promoteur insuline est pas réellement spécifique des cellules beta, mais c'est (pour un exercice) un détail.  [...]

[Immunologie] Signalisation T

Et j'aurai une petite question de biotech aussi... Quand on fait de souris transgéniques en immuno, on utilise souvent un promoteur CD2... pourquoi Pourquoi ne pas utiliser tout simplement le promoteur de notre gène d'intérêt.  [...] Le pervanadate est un inhibiteur de tyrosine phosphatases (PTP), il n'active pas les kinases. Il fait donc pencher la balance protéines phosphorylées / déphosphorylées. Ainsi les cellules finissent par avoir une grande partie de leur protéines phosphorylées (c'est pas très subtile comme méthode).  [...]

Évolution de la tumeur : l'inflammation protumorale | Dossier

Dans le corps humain, l' inflammation est activée par la blessure ou l'infection d'un tissu. L'inflammation est provoquée par des cellules présentes dans la zone endommagée, comme les plaquettes dans un caillot sanguin, qui sécrètent des facteurs inflammatoires comme le PDGF ( Platelet-Derived Growth Factor.  [...] L'inflammation représente un avantage pour la tumeur puisqu'une part importante du processus inflammatoire est dédiée à la reconstruction du tissu ce qui sollicite des mécanismes intervenant aussi dans la tumorigenèse. L'inflammation tumorale est induite par des facteurs inflammatoires sécrétés par les cellules tumorales, tel que le PDGF qui recrute des macrophages au sein de la tumeur (Figure 25), elle se comporte ainsi comme un puissant promoteur tumoral.  [...]

[Biotechnologie] le système pET - surexpression de protéines

La question 1 est juste car lorsqu'on ajoute un dérivé du lactose, l'IPTG, qui a l'avantage de ne pas être métabolisable, on induit l'expression de la T7 RNA polymérase et du gène d'intérêt. Ceci est un mécanisme de régulation classique par l'opéron lactose qui est situé dans le promoteur de la T7 RNA polymérase (lacUV5) et dans le promoteur du gène d'intérêt.  [...] Le promoteur lacUV5 est un promoteur artificiel bricolé pour l'occasion. Il est muté de maniere a le rendre moins sensible a l'AMPc. Ainsi il y a moins de fuite en absence d'induction (meme s'il y en a toujours un peu). Il est intéressant de noter que l'AMPc augmente avec la densité cellulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelle stratégie adopter?

Pour se faire j'ai construis deux vecteurs, le premier contient un promoteur fort puis la PG1 et la GFP et le deuxième contient un promoteur fort puis la SIRT1 puis la luciférase je réalise un BRET en excitant la luciférase avec coelenterazine j'ai donc fluorescence de la GFP j'ai donc bien montré l'interaction or le professeur me demande de faire un test de localisation puis un test de fonction de la proteine endogène pour cela est ce que je dois prendre des cellules hépatiques non transfectées comme temoin pour la localisation il me semble qu'il serait judicieux de faire une immunohistochimie mais est ce que je detecte les 2 proteines dans la meme cellule et ceci avec 2 anticorps différents couplés avec une fluorescence différenteet pour la fonction je ne sais pas dutout d'autant plus qu'il faut savoir si la proteine chimerique modifie les fonctions endogènes de la proteine pour ca je netrouve pas de strategies.  [...] D'ailleurs au passage la protéine chimérique modifie peut-être aussi l'interaction, d'où l'avantage de faire ta colocalisation sur des cellules non transfectées si possible.  [...]

Ogm

Le gène d'intérêt ne peut être dans le plasmide de part avance. Ce gène d'intérêt doit déjà être une construction composée d'un promoteur venant d'un organisme, du gène qui porte le nom d'intérêt venant d'un autre organisme,et d'un terminateur venant lui aussi d'un autre organisme.  [...] En fait les plasmides existe en plusieurs exemplaires dans la bactérie (selon la taille du plasmide et sont utilité ça peut aller de quelques exemplaires a plusieurs dizaines) mais c est surtout par la multiplication des bactéries que le nombre de plasmides est augmenté ensuite on fait éclater les cultures bactériennes et on récupère les plasmides d intérêt.  [...]