• Santé - Cellules, Patient, Vecteur, ADN

Définition | Thérapie génique | Futura Santé

Les acides nucléiques sont introduits dans les cellules du patient grâce à un vecteur viral ou injectés directement dans les cellules sous forme d'ADN nu. Les nouvelles méthodes d' édition génomique (CRISPR-Cas9) peuvent aussi servir à modifier le génome.  [...] Dans le traitement du cancer, la thérapie génique peut modifier des cellules immunitaires du patient pour qu'elles détruisent les cellules cancéreuses. Ainsi, les lymphocytes T modifiés en cellules appelées CAR-T ont donné des résultats encourageants dans des cas de leucémies.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séparation d'ADNs

Comment puis-je isoler l'ADN génomique de l'ADN épisomique (genre vecteur transitoire) de cellules en culture En sachant que.  [...] - je ne dispose pas d'ultracentri (gradient ClCs ou sucrose impossible).   [...]

Thérapie génique : un espoir contre la bêta-thalassémie

On fait de l'addition de gène, pour remplacer celui qui fait défaut, grâce à une sorte de cheval de Troie qui va amener l' ADN thérapeutique, indique le Pr Leboulch. Pour les patients thalassémiques atteints de la forme grave et sans donneur de moelle compatible, avec des organes encore en bon état, on prélève des cellules souches du sang, on les mélange avec le vecteur, on congèle et on vérifie que le gène est bien rentré dans l'ADN.  [...] On décongèle et on place ces patients sous perfusion pour réinjecter ces cellules souches modifiées, ajoute-t-il. Le vecteur, appelé LentiGlobin, qui véhicule le gène-médicament, est fabriqué par bluebird bio.  [...]

[Génétique] Question: Cellulle souche, rétine et colobome

Une thérapie génique n'est pas une question de cellule souche. on prend un vecteur particulier pour aller changer l'ADN dans les cellules déjà en place.  [...] J'ajoute un point au niveau du rejet. Il est aujourd'hui possible d'utiliser des cellules souches qui sont fabriquées à partir de cellules adulte du propre patient, ce qui revient à dire que le patient aura à disposition ses propres cellules souches qui ne seront donc pas rejeter par l'organisme.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

Je suis actuellement en train d'essayer de cloner un gène muté de 5kb dans un vecteur. Pour celà, je dois préalablement réaliser des PCR à partir de l'ADN du patient. Ces PCR se font en deux étapes.  [...] Piste 3. Controle positif (50ng du plasmide contenant le gène wt). On y devine bien une bande au bon PM, mais celle-ci reste bien trop faible pour être purifiée (et le but est de purifier la bande pour l'ADN patient).  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

Une méthode simple de criblage est l'hybridation sur membrane avec une sonde radioactive. Par exemple, si tu as réalisé ta banque par clonage avec des plasmides chez E. coli, tu fais une réplique des boîtes de Petri contenant la banque sur une membrane de nitrocellulose, tu soumets la membrane à l'action de la soude (qui lyse les bactéries et dénature l'ADN), ensuite tu incube la membrane avec une sonde radioactive complémentaire de ta séquence d'intérêt, puis tu révèles par autoradiographie.  [...] En bio moléculaire, on parle de clones souvent pour parler de gènes. En gros on a un gène lambda, on l'insère dans un vecteur (grosso modo un ADN avec des gènes de machinerie d'expression ) et ensuite on insère ledit vecteur dans une bactérie pour faire multiplier le gène, par les divisions cellulaires successives, les cellules bactériennes issues de la même cellule mère étant sur le papier, identiques.  [...]

Définition | Lentivirus | Futura Santé

Les lentivirus sont des virus sphériques encapsulés, mesurant entre 80 et 100 nm de diamètre. Des projections à la surface de l'enveloppe virale paraissent semblables à des pics. Grâce à ces antigènes, ils peuvent pénétrer dans les cellules et insérer leur patrimoine génétique, sous forme d'ARN.  [...] Par leur mode d'action, les lentivirus constituent de bons candidats au rôle de vecteur dans la thérapie génique. Il s'agit d'équiper un virus inoffensif d'un gène d'intérêt et de le laisser s'insérer dans l' ADN des cellules cibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

On peut volontairement synthétiser un brin d'ADN à partir d'un ARN en particulier de l'ARNm eucaryotique de façon à avoir un brin d'ADNc (ADN complémentaire) que l'on peut introduire dans un vecteur en vue d'un clonage. Cet ADNc une fois traduit dans des cellules procaryotiques donne un ARNm sans introns qui peut être traduit sans trops de problèmes.  [...] je pense que cette technique est le northern blot c'est à dire le transfert d'ARN sur membrane de nitrocelluloseou nylon à partir d'un gel d agarose, par capillarité suivie d'une étape d'hybridation à ADN complémentaire et c'est là qu'intervient la reverse transcriptase car c'est une enzyme qui permet à partir d'un ARN d'obtenir un ADN complémentaire.  [...]

[Génétique] ADN recombinant transporté in vivo ou ex vivo dans contenu ?

. qui transporte l'ADN recombinant. En gros je veux dire que l'ADN recombinant n'est pas injecté comme ça librement en tant que plasmide ou autre il faut bien un transporteur non.  [...] pas forcément. On peut par exemple faire rentrer de l'ADN (ou ARN) linéaire ou circulaire dans des cellules eucaryotes ou procaryotes en utilisant un choc electrique, et rien d'autre. Pas de vecteur dans ce cas la (enfin, ça dépend de la définition).  [...]

[Biochimie] Quelques questions sur les OGM

Avantage. les utilisations qu'on peut en faire, comme par exemple en agriculture rendre les espèces résistantes aux conditions difficiles (vent, sécheresse...), ça permet aussi de rendre les espèces résistantes aux herbicides et aux ravageurs. Sinon, il y a d'autres exemples d'utilisation.   [...] Les techniques sont assez complexes mais on a recours a des techniques de recombinaison homologue dans des cellules souche. La recombinaison homologue permet d'insérer dans le génome un morceau d'ADN qui contiendra la séquence qu'on veut intégrer. Si on ne veut pas forcément contrôler le lieu d'insertion du gène, on peut utiliser un vecteur qui integrera la séquence n'importe ou dans l'ADN (un virus par exemple).  [...]