• Santé - Cellules, Labo, Habitude

[Biologie Cellulaire] Culture de cellules non adhérentes

Mon soucis est que c'est la rpemière fois que l'on cultive ce genre de cellules au labo et que j'ai plutot l'habitude des cellules adhérentes ou il est très simple de voir quand les cellules sont confluentes et donc bonnes à passer.  [...] J'ai plutôt l'habitude également de travailler sur des cellules adhérentes mais j'ai bossé sur des lymphoblastes immortalisés pendant un stage. De ce que je me souviens, le mieux c'est que tu fasse une petite courbe de croissance au départ pour voir à quelle vitesse elles poussent, puis l'avantage pour les passer c'est que pas besoin de trypsine.  [...]

[Biochimie] Comment réparer une cuve de migration ?

(si ça urge et que t'as pas le matos tu peux même joindre les 2 morceaux de fil avec un bout d'aluminium mais bon l'alu c'est pas un très bon conducteur et tu risque d'avoir des petits problèmes de migration si ça chauffe trop. Ça dépanne (je l'ai fait avec un appareil de transfert) mais c'est pas conseillé.   [...] Oui sauf que les fils utilisés dans les cuves d'électrophorèse sont la plupart du temps en platine. Les fils se remplacent et tu peux trouver des rouleaux de fil de platine dans les catalogues des revendeurs (mais ca coute cher).   [...]

[Biologie Moléculaire] Sds-page

SVP j'ai besoin d'aide car mon gel polyacrylamide ne veut pas polymériser, si je ne mélange que l'acry + le bis+ TEMED+ APS j'obtient un bon gel mais dés que je rajoute la slution tampon que je prépare moi même j'obtiens un liquide si kelkun peu m'aider.   [...] Personne ne peut vous aider dans votre labo question protocole, qui a l'habitude de le faire.  [...]

Méthode de marquage - HaloTag

Si j'ai bien compris la brochure, en gros au lieu d'avoir une GFP comme protéine de fusion, c'est le Halo tag qui est couplé à la protéine d'intérêt. Le principe a l'air assez simple, en gros on peut ensuite coupler n'importe quoi sur le Halo (billes, biotine, fluorophore.   [...] ..). Ce qui fait qu'on peut l'utiliser pour localiser la protéines d'intérêt dans un tissu ou une cellule avec la fluo, mais aussi coupler avec des billes pour faire un réaction biochimique, ou encore fixer la protéine sur une lame de verre, le tout sans devoir recommencer le clonage à chaque nouvelle application.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage immuno histo enlever le bruit :o((

Le bruit que tu as est certainement du à un interférent, ou à un point critique de ton marquage qui n'est pas maitrisé. C'est souvent sur la préparation de coupe et non sur le marquage lui même que les points critiques sont à surveiller particulièrement.   [...] Il faut persévérer, ou faire appelle à un labo qui a l'habitude de faire ce type de manips.  [...]

[Biologie Cellulaire] Retour d'experience: utilisation de WST-1?

La brochure a l'air particulièrement attirante avec la promesse de manip simples et efficaces pour tester la viabilité des cellules. J'aimerais maintenant savoir si cela est conforme a la réalité.  [...] Personnellement, j'ai plus l'habitude d'utiliser le MTS, mais c'est le même principe. Des gens du labo utilisent le WST-1 et semblent également satisfaits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

j'essaye de mettre au point une extraction d'ARN sur des échantillons d'urine. Mon seul soucis, c'est que la quantité récupérée avoisine les 3ng/µl... Travaillant d'habitude sur des cellules, je n'ai pas l'habitude de travailler avec des prélèvements tels que l'urine.  [...] Avec les kits disponibles aujourd'hui c'est possible d'avoir assez d'ARN pour bosser à partir de très peu de cellules, renseignes toi chez les fournisseurs habituels de ce type de kit d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Coopération / RT-PCR

Je me permets de poster ce message car je suis à la recherche d'une coopération urgente avec un labo qui fait de la RT-PCR et des Westen Blots. En fait, nous faisons très peu de bio mol dans notre labo. On est plus orienté chimie analytique et expérimentation animale sur des modèles tumoraux.  [...] D'habitude, pour effectuer des W Blots et RT-PCR, il y avait un labo voisin de Paris XI, qui était doté du matériel ad hoc et avec lequel on coopérait et publiait ensemble.  [...]

[Zoologie] HELP!ma petite chatte Loola va tres mal. Elle a du sang dans l'iris et reste prostrée - Page 2

Ensuite, un véto a l'habitude de bosser avec un labo pour tel ou tel type d'analyses. Une valeur dans un labo ne dit pas la même chose que la même valeur dans un labo à côté.  [...] je la trouve un peu mieux malgré tout.. depuis quelques jours elle reviens me reveiller comme elle avait l'habitude avec son petit nez mouillé et elle ronronne pendant 5 minutes..elle avait arreté de faire cela depuis 3 semaines. ses yeux semblent aller un peu mieux aussi.  [...]

Problème de WB, HRP sensible à la lumière ?

Je sais que dans certains labo le blot de l'anticorps secondaire se fait à l'abri de la lumière. Je n'ai pas l'habitude de faire comme ça et jusqu'à présent je n'avais pas de problème.  [...] - vérifie tous tes produits (fabrication des gels, des différentes solutions genre celles que tu utilises pour diluer tes anticorps). Si tu as le moindre doute sur un produit (date de péremption, conservation à la mauvaise température, cpontamination,...).   [...]