• Santé - Cellules, Culture, Extraction, Protéine

[Biologie Cellulaire] Etudier l'expression d'une protéine entre différentes cellules.

pour suivre l'expression de la protéine tu peux faire un extraction purification de la proteine dans les deux cellules séparément puis tu fait un blotting ( westerne blot pour suivre le niveau d'expression de la protéine c'est-à-dire la quantité de la protéine dans les deux cellules).  [...] pour cela tu mets les cellules en culture puis à un certain temps tu prélève les cellules et tu fait l'extraction de la protéine et purification. lorsque tu fait le westerne blot tu révélera avec des anti-corps diriger contre la protéine d'intérer. sinon tu peux faire aussi un marquage de la protéine avec des acides aminées radioactive en utilisant la technique de pulse chasse.  [...]

[Biochimie] La synthèse des protéines !

Cellule nuclée et énuclée. des acides aminés radioactifs (leucine h3) ont été ajoutés au milieu nutritif des cellules en culture. Certaines cellules sont normales, d'autre ont été énuclées ( extraction du noyau) avant l'introduction de h3 dans le milieu. Cette technique d'autoradiographie permet de localiser la leucine incorporée dans les proteines.  [...] Tu peut en conclure que l'extraction du noyau ne stop pas la synthèse des protéines. Lorsque le noyau est retiré, il reste des ARNm dans ta cellule, et ce sont ces ARN qui sont traduit en protéines.  [...]

extraction et dosage des protéines totales

Je voudrais savoir quelle quantité de protéine on peut s'attendre à obtenir après extraction à partir de neurones. 1µg/million de cellules 1mg/million de cellules.  [...] J'ai lu plusieurs thèse où, après culture cellulaire, il faisait une extraction sur un échantillon de 1 000 000 de cellules (c'est courant j'ai l'impression) puis un dosage pour savoir la bonne quantité à déposer sur des gels de western-blot.  [...]

[Biologie Moléculaire] les cellules d'ovaire de hamster chinois

j'ai une recherche sur les proteines recombinantes, et je cherche actuellement l'utilité de cellules CHO dans cette production.  [...] svp je veux savoir comment on fait l'extraction,la culture et la preparation des cellules d'ovaire de hamster chinois avant de passer à la transformation.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]

[Biologie Cellulaire] Apoptose et le gène Bax

J'ai à étudier l'effet pro-apoptotique de la toxine émétique (=céréulide) de Bacillus cereus sur des cellules 3T3 en culture.  [...] Pour détecter ensuite l'apoptose, je pense extraire les ARN totaux de mes cellules (phénol-chloroforme-alcool isoamylique), puis faire une RT-PCR grâce à des amorces spécifiques du gène Bax.  [...]

[Biologie Cellulaire] Conservation de biopsies de peaux

[Biologie Cellulaire] Conservation de biopsies de peaux.  [...] Je souhaiterais savoir qu'elle est le meilleur moyen de conserver des biopsies de peaux (pour le transport) afin d'effectuer par la suite une extraction/ isolation et culture des cellules cutanées.  [...]

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes?

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes.  [...] Comment désagréger des protéines recombinantes La protéine est produite dans E.coli puis je procède à une extraction protéique, une purification IMAC et un dessalage. Enfin, je la filtre à 0.2um avant de la tester sur cellules mais la protéine d'intêret forme des agrégats après quelques jours de conservations à 4°C ce qui m'oblige à relancer des campagnes de production.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN Lignée cellulaire et Bactérie

J'aimerai profiter de votre savoir vis à vis de l'extraction d'ARNm dans le cas suivant. Je vais mettre en culture des bactéries (lactique) sur des cellules (HT-29) pendant quelque. En fin de cinétique j'aimerai pouvoir isoler l'ARN Bactérien ainsi que l'ARN eucaryotes.  [...] même si je ne vois pas bien l'intérêt de mettre des bactéries en culture sur des cellules si tu veux séparer les ARNm distinctement pourquoi ne pas essayer une centrifugation. Ensuite tu extraits une des deux ou les deux phases et tu fais ton extraction.  [...]

[Biologie Cellulaire] Détergent pour cellule humaine

je suis confrontée à un problème. je travaille sur l'expression d'une proteine virale dans des cellules humaines que je ne parviens pas à solubiliser après extraction des protéines cellulaires. Un protocole est déjà au point pour l'expression chez la bactérie et la levure et cette étape de solubilisation permettant d'extraire la protéine des membranes fonctionne et pour cela nous utilisons du Chaps.  [...] Je pense que la question était surtout. est ce qu'un protocole pour levure ou bactérie fonctionne en cellule mammifère non.  [...]