• Santé - But, Membrane, Protéines

Matériels et méthodes | Dossier

L'électrophorèse a pour but de séparer les protéines sur un gel de polyacrylamide, ensuite ce gel est mis en contact avec une membrane de nitrocellulose et, un courant allant du gel vers la membrane permet de fixer les protéines contenues dans le gel sur cette membrane.  [...] Le but ensuite est de pouvoir repérer les protéines étudiées sur le support. Pour cela, la membrane est incubée avec un anticorps primaire capable de reconnaître la protéine recherchée et de la fixer, puis un anticorps secondaire marqué à la peroxydase est ajouté au milieu afin qu'il puisse se fixer sur le premier anticorps.  [...]

extraction et séparations des composants d'une membrane

En fait l'idée serait d'obtenir une phase uniquement composée de lipides et une autre avec le reste, pour pouvoir ne récupérer que les lipides dans le but de former une membrane artificielle sans protéines.  [...] Si ton but est de faire une membrane artificielle (sans protéines) le mieux est de partir de faire des phospholipides (glycérol + acide gras en quantité en défaut puis phosphorylation via kinase = ATP... = p-t un peu compliqué) ou une molécules apparentées (amphiphiles).  [...]

[Biologie Cellulaire] Protocole expérimental

Ben je ne vois pas trop ce qui vous pose problème dans le processus expérimental que vous décrivez. La première chose est de faire une simple lyse cellulaire afin de libérer les protéines cytoplasmiques. Vous centrifugez, récupérez le surnageant et vous avez votre extrait cytoplasmique.  [...] Perdu parce que les détergents vont vous embêter ensuite. Sauf si vous voulez les protéines membranaires c'est inutile. Il y a une méthode plus simple, que l'on voit en première année de biologie. Un truc tout bête qui fait exploser les cellules.  [...]

[Biochimie] Dialyse

mes questions sont, qu'est ce que exactement la solubilisation de la membrane le détergent est nécessaire pour la solubilisation de la membrane, c'est pourquoi on cherche a s'en débarrasser après.  [...] et après cela, le complexe protéique a une chance sur deux d'être insérés dans le même sens que la membrane biologique. et s'il y a échec de reconstitution, on se retrouve avec quoi.  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Dans le but d'étudier les interactions entre 2 protéines, je voudrais faire un dot plot pour immobiliser ma première protéine sur la membrane de nitrocellulose, par la suite je voudrais faire un overlay ou j'incube ma membrane de nitrocellulose dans la solution de la deuxième protéine et je révèle les interactions par l'anticorps de la deuxième protéine.  [...] Ce n'est pas une technique très courante a ma connaissance, et à mon avis la façon de procéder dépend énormément de la nature des deux protéines dont on veut étudier l'interaction.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéines et membrane plasmique

-Nous avons vu en cours que les protéines périphériques pouvaient se lier à un acide gras (AG) de la bicouche lipidique par une liaison covalente.Je n'ai pas bien compris si cette liaison covalente se trouve entre la protéine et l'AG ou entre l'AG et la membrane plasmique.  [...] Les protéines périphériques peuvent en effet être reliées covalemment à des AG comme le palmitate (palmitoylation) ou le myristate (myristoylation), pour améliorer leur fixation à la surface de la membrane. D'autres modifications post-traductionnelles comme la géranylgéranylation, la farnésylation, ou la glypiation peuvent avoir lieu dans le même but.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge. L'électrophorèse a pour but de séparer les protéines sur un gel de polyacrylamide, ensuite ce gel est mis en contact avec une membrane de nitrocellulose et un courant allant du gel vers la membrane ce qui permet de fixer les protéines contenues dans le gel sur cette membrane.  [...] La membrane est alors incubée avec du luminol qui est dégradé par la peroxydase en libérant de l' énergie lumineuse capable d'impressionner un film photographique hypersensible. Les protéines apparaissent alors sous la forme de bandes sombres sur le film.  [...]

Schémas d'activation de la protéine Kinase C | Dossier

Il semblerait également que certains activateurs de la [PKC ] ( esters de phorbol, DAG inséré dans la membrane et calcium) puissent stimuler la PLD. Il est à noter que certaines isoformes de la [protéine kinase C ] (&alpha. et &beta.I) soient capables d'activer la phospholipase D par l'intermédiaire d'une protéine G de la famille ARF ( ADP ribosylation factor).  [...] Ainsi, en réponse à son activation, la [protéine kinase C ] est transloquée vers la membrane plasmique. A ce niveau, plusieurs protéines ont été caractérisées comme protéine d'ancrage, parmi lesquelles RACK (receptor for activited C kinase). elle a une masse moléculaire allant de 30 à 36 kDa.  [...]

[Biochimie] Dilution de protéine dans de l'eau distillée

Je travail sur un projet de purification de protéine dans le but de les tester comme Ag par immunoblot. Je voulais tester plusieurs concentrations de protéines donc je les ai diluées dans de l'eau distillé puis je comptait les déposer sur des membrannes de PVDF.  [...] dans votre cas vous allez étudié des interactyions proteines-ligands (ac-ag) ce sont des interractions de faibles énergies le plus souvent (ces des complexes non covalent métastable ) il va avoir aussi une phase de désorbtion ionisation qui requiert des conditions appropriées donc une simple variation de ph avoir son influence.  [...]

Solubilité des protéines et role d'un acide biliaire

Les détergents ioniques ont pour but de déchausser les protéines des membranes en les recouvrant de charges, les séparant de ce fait. Pour l'action des solvants organiques sur les membranes, cf nos amis chimistes.  [...] Les protéines sont transférées de la membrane à une sorte de micelle, et donc mises en suspension sans dénaturation. C'est de cette manière qu'on obtient des protéines membranaires cristallisables, pour étudier leur structure par diffraction des RX.  [...]