• Santé - Blocage, Sites, Fixation, Anticorps, Protéines, Membrane, Différent

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet. la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout.  [...] Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

blocage de la membrane. cette étape est indispensable pour limiter les interactions non spécifiques ultérieures entre les anticorps et la membrane. Le blocage est réalisé dans une solution de protéines concentrées.  [...] détection. le principe consiste à appliquer sur la membrane des anticorps marqués qui sont spécifiques des protéines que l'on veut observer. On pourra ainsi observer leur position sur le gel.  [...]

vaccin

L'organisme peut reconnaître 1 milliard d'antigènes. Lors du premier contact avec un antigène, offensif ou non, il y a une réponse immunitaire primaire, lente et création d'anticorps mémoire. Ceux sont mis en jeu lors du second contact avec l'antigène qui fait partie du répertoire de reconnaissance rapide et qui se traduit par une réponse immunitaire très forte par rapport à la première.  [...] Si le contact est fait, alors le Lymphocyte B crée des anticorps, petites protéines qui reconnaissent spécifiquement les antigènes des intrus et les empêche de faire leur travail contre nous (blocage de tous les sites du virus, précipitation, agglutination, etc...).  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunocytolocalisation - Anticorps primaire 3-4h ?

Je dois faire des immunolocalisations sur cultures cellulaires. Mon anticorps primaires fonctionnent vraiment très bien (anti-FLAG M2).  [...] En tout cas, je vous confirme bien que cela fonctionne. Comme je n'avais pas encore lu les dernières réponses, j'ai fait 30 min de fixation, blocage au lait 10% pdt 1h, 3h d'anticorps primaire et 1h d'anticorps secondaire.  [...]

[Microbiologie] western blotting

j'ai fait migrer mes protéines par sds page en puits confondus, sur le gel les bandes sont nettes, en faisant le transfert sur membrane de nitrocellulose et après révélation par le 4 chloro1 naphtol je n'ai pas obtenu des bandes pourquoi à votre avis sachant que le transfert s'est bien passé j'ai dilué les anticorps primaires 1/100 et les anticorps secondaires 1/2000 je doute par rapport au titre des anticorps que j'ai utilisé sachant qu'ils proviennent des patients atteints de Mycoplasma pneumoniae qu'est ce que je dois faire.  [...] Le rouge ponceau est aussi pratique pour vérifier qu'il y a bien des protéines sur la membrane, les étapes de blocages peuvent parfois etre problématiques. J'ai parfois observé qu'un blocage plus court améliorait les signaux.  [...]

Le venin de serpent inspire la lutte contre le cancer

De plus, la cellule peut ainsi se fixer aux parois du vaisseau sanguin, puis former des métastases et finalement se propager à l'ensemble de l'organisme. L'équipe avait alors démontré que le blocage de la fixation de la podoplanine sur les plaquettes grâce à un anticorps spécifique empêchait la propagation des métastases dans les poumons de souris.  [...] Ces résultats suggèrent que l'interaction entre le récepteur CLEC-2 et la podoplanine est indispensable à la différenciation des vaisseaux lymphatiques. A l'image de ce que l'on sait sur la néogenèse des vaisseaux sanguins induite par les tumeurs, les cellules tumorales pourraient également induire la formation des vaisseaux lymphatiques pour favoriser la propagation des cellules cancéreuses dans l'organisme.  [...]

[Immunologie] (Universitaire) - Immunohistochimie des ganglions lymphatiques

La manière de poser la question est un peu étrange, mais un fait à prendre en considération quand on fait de l'IHC (ou du FACS) sur des tissus lymphoides (ou contenant simplement beaucoup de cellules inflammatoires) est la fixation non spécifique des anticorps aux récepteurs Fc.  [...] Voici un article de Nature qui dit que le blocage n'est pas vraiment nécessaire, car les récepteurs Fc ne maintiennent pas la capacité de lier les anticorps lorsque les cellules sont fixés. http.//www.nature.com/srep/2011/1107...srep00028.html.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

quelqu'un aurait de l'expérience en IF voici mon problème. j'ai jusqu'à présent travaillé avec des cellules vivantes en fusion GFP. Désormais je dois faire des IF sur cellules fixées. Pas de problèmes pour un marquage de la tubuline (avec des anticorps) ou pour un marquage actine (avec de la phalloidine), mais pas moyen d'avoir un signal avec ma protéine d'intérêt.  [...] fixation à la PFA, je n'utilise pas de méthanol étant donné que ma protéine pourrait avoir un lien avec le cytosquelette et il me semble que la fixation méthanol n'est pas top pour le cytosquelette... j'ai testé avec ou sans permeabilisation avec du triton, blocage lait ou blocage serum ou pas de blocage.  [...]

Inhibiteurs de cyclooxygénases | Dossier

Normalement, l' acide arachidonique, libéré des membranes, s'engage dans le canal hydrophobe de la cyclooxygénase et établit une liaison avec l'Arg 120. La transformation de l'acide arachidonique en PGG 2 puis en PGH 2 commence alors. Les AINS peuvent également s'engager dans ce canal (fig.  [...] Les conséquences de la fixation de l'aspirine sur COX-1 et COX-2 sont différentes. La sérine acétylée provoque une saillie dans le canal hydrophobe et empêche la formation de PGG 2 pour les deux isoformes. Mais, alors qu'elle provoque un blocage complet au niveau du site actif de COX-1, elle permet la biotransformation de l'acide arachidonique en 15-R-HETE par un nouveau mode de fonctionnement de la COX-2 (Terlain B. et al., 1996).  [...]

[Biologie Moléculaire] Aide Western Blot avec "taches" claires (marbrures de non marquage)

-Le blocage se fait dans des petits bacs à plat (lait écrémé ou BSA selon anticorps). Le volume semble suffisant et j'ai essayé avec plus sans faire mieux.  [...] Je suis régulièrement obligé de déshybrider la membrane et refaire blocage/incub etc pour avoir les taches en dehors de mes bandes -pas au même endroit sur la même membrane- (ou pas du tout parfois). Donc le pb est pendant blocage/incub. Mais je ne trouve pas quoi malgré mes différents essais.  [...]