• Santé - Blocage, Protéine, Western

[Biochimie] Contrôle d'inhibition de la dégradation lysosomale

J'inhibe la dégradation par les lysosomes (avec plusieurs concentrations de leupeptine) et j'aimerai trouver un contrôle positif de mon blocage c'est à dire une protéine qui s'accumule sous leupeptine en western.  [...] Oui un récepteur ca aurait pû convenir mais je travaille en cellule S2 (pool de cellules embryonnaires de drosophile) et je ne sais pas trop qui est exprimé et qui ne l'est pas. Je recherche donc une protéine TRES ubiquitaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

quelqu'un aurait de l'expérience en IF voici mon problème. j'ai jusqu'à présent travaillé avec des cellules vivantes en fusion GFP. Désormais je dois faire des IF sur cellules fixées. Pas de problèmes pour un marquage de la tubuline (avec des anticorps) ou pour un marquage actine (avec de la phalloidine), mais pas moyen d'avoir un signal avec ma protéine d'intérêt.  [...] fixation à la PFA, je n'utilise pas de méthanol étant donné que ma protéine pourrait avoir un lien avec le cytosquelette et il me semble que la fixation méthanol n'est pas top pour le cytosquelette... j'ai testé avec ou sans permeabilisation avec du triton, blocage lait ou blocage serum ou pas de blocage.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot/azide?

pendant l'étape de blocage de Western Blot on utilise le lait (écremé) pour éviter les bruit du fond mais aussi de l'azide à 0.01%.  [...] Pour ce dernier (azide ou azoture) je pense que c'est pour la conservation Et pourquoi on ne l'utilise pas pendant l'étape où on va ajouter le deuxième anticorps couplé à HRP.   [...]

[Biologie Cellulaire] PBS ou TBS

Il a particulièrement insisté sur le fait que les surfactant n'étaient pas trés stable et que les produits de dégradation peuvent dénaturer le protéines. Il fut donc les acheter par petites quantité afin d'éviter les soucis. Pour lui c'est la principale cause de problème sporadique en IHC.  [...] autre petite question. est que vous savez pourquoi le tampon de blocage contenait du Triton (solvant dont je connais le role ) pour l'ICC et pas pour le western.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un Western blot par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de blocage qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe.  [...] La membrane ne peut plus coller de protéines aux endroits où des protéines s'y sont déjà fixées. Il reste cependant une surface importante encore adhésive où l'anticorps, qui est une protéine, se fixera. Pour l'empêcher on incube donc la membrane en présence de protéines, ainsi elle ne pourra plus scotcher l'anticorps, ce sera en quelque sorte comme si du ruban adhésif avait été souillé par de la poussière.  [...]

[Biochimie] La BSA

La BSA est principalement utilisée soit pour bloquer les sites aspecifiques sur les membranes lors des western-blot, et comme stabilisateur dans les réactions enzymatiques.  [...] La BSA est utilisée, comme dit Yoyo, pour le blocage des sites aspécifiques lors du Western, aussi pour faire des gammes étalon lors de certains dosages (Bradford), aussi je l'ai utilisée pour diminuer mon bruit de fond lors d'hybridation sur microarray, parfois elle peut être aussi utilisée en tant que témoin de charge (dans des gels).  [...]

En bref : un antidépresseur pourrait servir à traiter l'herpès

Des médecins états-uniens décrivent une nouvelle stratégie de traitement de l'herpès qui cible une protéine intervenant dans l'expression des gènes viraux. Des résultats encourageants ont été obtenus chez la souris, grâce au blocage du cycle viral.  [...] Les chercheurs ont montré que le fait de bloquer l'activité d'une protéine - LSD1 - qui intervient dans l'expression de gènes viraux, permettait de réduire le cycle infectieux. Ils ont pour cela utilisé une molécule appelée tranylcypromine, utilisée en... psychiatrie&thinsp.  [...]

Le traitement de la grippe aviaire et des virus influenza | Dossier

La protéine M2 agit comme une pompe à protons qui régule le pH interne du virus. l'acidification du virus étant nécessaire à son encodage, le blocage de la protéine M2 entraîne l'arrêt de la réplication virale au stade précoce de l'infection.  [...] Les inhibiteurs de protéases pourraient inhiber les fonctions protéolytiques ou endonucléolytiques de la sous-unité PA. Ces fonctions sont indispensables à la transcription de l'ARN viral en ARN messager et leur blocage entraîne une réduction de la réplication virale (Savarino 2005 83 ).  [...]

Grippe aviaire : découverte du talon d'Achille du virus H5N1

Les deux principaux médicaments utilisés aujourd'hui contre la grippe aviaire reposent sur le même principe. le blocage de la protéine neuraminidase (N), qui permet au virus de quitter les cellules déjà infectées et de se propager.  [...] A l'époque où ils ont été conçus, seules les formes N2 et N9 de la neuraminidase avaient été étudiées par cristallographie aux rayons X, et c'est donc tout naturellement qu'on avait octroyé aux médicaments la structure moléculaire adéquate. Les scientifiques avaient ensuite pu vérifier l'efficacité du Tamiflu et du Relenza sur les autres types de neuraminidases, et en avaient conclu que la géométrie du site actif de la protéine ne différait pas d'une forme à l'autre.  [...]

[Biochimie] bandes parasites aprés révélation western-blot

mon éluat final d'IP contient l'Ac que j'ai utilisé pour réaliser mon IP et bien sur ma protéine d'intérêt, je réalise ensuite un SDSpage et un western sur la nuit, je révèle mon blot à l'aide de l'Ac que j'ai utilisé pour mon IP ainsi qu'avec un Ac-HRP dirigé contre mon Ac d'IP, je bloque la membrane avec lait écrémé 3%.  [...] apré révélation du blot à l'opti 4CN (biorad) je retrouve bien ma protéine d'intérêt (IP fonctionne) ainsi que la bande haute et basse de mon Ac spécifique de ma protéine, mais si je laisse le blot révélé plus longtemps, je vois apparaitre d'autres bandes autour de celles de l'Ac (révélation du blot ~2min) ces bandes sont elles dû à un mauvais blocage de la membrane utilisation d'un Ac-HRP polyclonal comme Ac secondaire.  [...]