• Santé - Biologie moléculaire, Température, Hybridation

[Biologie Moléculaire] Besoin explication température d'hybridation

pourtant la température d'hybridation utilisée dans le thermocycleur varie de 59 à 45 °C (intervalle de 1 °C a chaque cycle), alors que j'aurais pensé qu'il fallais une Ta de 63°C.  [...] En PCR on cherche à ce que le maximum d'amorces soient hybridées (dans l'idéal 100%). Alors on se place générallement 5°C (voir plus) en dessous du Tm (c'est la température d'annealing ou Ta).  [...]

[Biologie Moléculaire] Température d'hybridation et MacVector

J'ai désigné deux amorces avec le logiciel MacVector pour faire une réaction PCR. La première amorce sens est de 27 bases et la deuxième antisens est de 21 bases. Lorsque j'ai fait le test des amorces par MacVector, il m'a dit que c'est bon pour les deux amorces et que la température de fusion Tm est de 62,1 pour les deux, et donc je peux conclure que la bonne température d'hybridation est 57,1.  [...] Mais, lorsque j'ai essayé de calculer la température d'hybridation par la fameuse formule 4(G+C) + 2(A+T) j'ai trouvé des températures d'hybridation de 69 pour l'amorce sens et de 61 pour l'amorce antisens. Je demande qui est le plus crédible. MacVector ou la formule classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] calcul de la température d'hybridation

[Biologie Moléculaire] calcul de la température d'hybridation.  [...] je veux effectuer une PCR mais le probleme se pose dans le calcul de la température d'hybridation des amorces, en attente de votre aide je vous remercie.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et température d'hybridation

J'aimerais savoir pourquoi augmenter la température d'hybridation permet une bien meilleure hybridation des amorces.  [...] Tu sais ce qu'est la Tm. la température à laquelle la moitié de ton ADN double-brin est sous formé simple-brin. La T°hybridation est donc celle où tes oligos (ADN simple-brin) s'hybrideront le mieux avec ta matrice. Si tu as, admettons, une hybridation de quelques nucléotides en 3' pas loins de ton autre oligo, voilà une bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire.  [...] Eliason et Nordstrom, Replication of minichromosomes in a host in which chromosome replication is random, Molecular microbiology. 1997.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation d'une sonde nucléique plasmidique

[Biologie Moléculaire] Hybridation d'une sonde nucléique plasmidique.  [...] J'ai répondu que l'ADN plasmidique est le témoin négatif et l'ADN génomique le témoin positif car il contient la séquence cible mais je ne sais pas comment l'expliquer ni comment expliquer leur nature.   [...]

[Biologie Moléculaire] Temps d'hybridation des amorces

Mais comme dis archaostol, le temps d'hybridation est température dépendant. Si tu as dénaturer un ADN double brin à 100°C (un peu près) et que tu le précipites d'un coups à 4°C, il va se réhybrider. Tellement vite qu'il va mal se réhybrider (mismatch, désapariement.  [...] ..). C'est pour cela que la température d'hybridation est généralement plus faible de 5-10°C de la température de fusion, nécessaire pour séparer les deux brins. Je rappelle également que la température de fusion est dépendante de la longueur de l'ADN, mais également de son pourcentage en GC (et d'autres paramètres plus complexes).  [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation ADN /ARN sens / antisens

Ma question concerne l'hybridation de séquence d'ADN et d'ARN mises en solution.  [...] Est-il possible qu'elle s'hybride malgré leur orientation identique.   [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation in situ d'ARN colorimétrique

[Biologie Moléculaire] hybridation in situ d'ARN colorimétrique.  [...] à trouvé une bonne explication de la technique d'hybridation in situ d'ARN colorimétrique avec des schémas (merci d'avance ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ-amplifiant de coloration

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ-amplifiant de coloration.  [...] Les systèmes d'amplification des signaux ne sont pas très satisfaisants. Ceux que j'ai vu n'amplifiaient pas vraiment et en plus donnaient souvent un signal nucléaire (ce qui est souvent aspécifique.). Un truc classique est l'ajout de PVA au moment de la coloration (NBT/BCIP ou BM Purple).   [...]